流式細胞儀結構簡介
【化工儀器網 技術指導】流式細胞儀(Flow cytometer )是對細胞進行自動分析和分選的裝置。它可以快速測量、存貯、顯示懸浮在液體中的分散細胞的一系列重要的生物物理、生物化學方面的特征參量,并可以根據預選的參量范圍把指定的細胞亞群從中分選出來。
流式細胞儀主要由四部分組成:流動室和液流系統、激光源和光學系統、光電管和檢測系統、計算機和分析系統。
流動室和液流系統
流動室由樣品管、鞘液管和噴嘴等組成,常用光學玻璃、石英等透明、穩定的材料制作。設計和制作均很精細,是液流系統的心臟。為了保證液流是穩液,一般限制液流速度υ<10m/s。由于鞘液的作用,被檢測細胞被限制在液流的軸線上。
激光源和光學系統
經特異熒光染色的細胞需要合適的光源照射激發才能發出熒光供收集檢測。常用的光源有弧光燈和激光;激光器又以氬離子激光器為普遍,也有配和氪離子激光器或染料激光器。在免疫分析中常要同時探測兩種以上的波長的熒光信號,就采用二向色性反射鏡,或二向色性分光器,來有效地將各種熒光分開。
光電管和檢測系統
經熒光染色的細胞受合適的光激發后所產生的熒光是通過光電轉換器轉變成電信號而進行測量的。光電倍增管(PMT)為常用。PMT的響應時間短,僅為ns數量級;光譜響應特性好,在200~900nm的光譜區,光量子產額都比較高。從PMT輸出的電信號仍然較弱,需要經過放大后才能輸入分析儀器。
流式細胞計中一般備有兩類放大器。一類是輸出信號輻度與輸入信號成線性關系,稱為線性放大器。另一類是對數放大器,輸出信號和輸入信號之間成常用對數關系。
計算機和分析系統
經放大后的電信號被送往計算機分析器。多道的道數是和電信號的脈沖高度相對應的,也是和光信號的強弱相關的。多道分析器出來的信號再經模-數轉換器輸往微機處理器編成數據文件,或存貯于計算機的硬盤和軟盤上,或存于儀器內以備調用。計算機的存貯容量較大,可存貯同一細胞的6~8個參數。存貯于計算機內的數據可以在實測后脫機重現,進行數據處理和分析,后給出結果。
除上述四個主要部分外,流式細胞儀還備有電源及壓縮氣體等附加裝置。
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