薄層色譜法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程
【化工儀器網(wǎng) 技術(shù)指導(dǎo)】薄層色譜法是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù),常用于進(jìn)行藥品的鑒別,雜質(zhì)檢查或含量測(cè)定。在使用時(shí),會(huì)將適宜的固定相涂布于玻璃板上,成一均勻薄層,等點(diǎn)樣、展開(kāi)后,與適宜的對(duì)照物按同法所得的色譜圖作對(duì)比。
操作方法:
1. 薄層板制備:將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合,去除表面的泡后,倒入涂布器中,在玻璃板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布(厚度為0.2—0.3mm),取下涂好薄層的玻璃板,置水平臺(tái)上于室溫下晾干,后在110℃烘30分鐘。即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度。
2. 點(diǎn)樣:用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣于薄層板上,一般為圓點(diǎn),點(diǎn)樣基線(xiàn)距底邊2.0cm,點(diǎn)樣直徑為2——4mm,點(diǎn)間距離約為1.5—2.0cm。點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜,點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。
3. 展開(kāi):展開(kāi)室如需預(yù)先用展開(kāi)劑飽和,可在室中加入足夠量的展開(kāi)劑,并在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條,一端浸入展開(kāi)劑中,密封室頂?shù)纳w,使系統(tǒng)平衡或按正文規(guī)定操作。將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開(kāi)室的展開(kāi)劑中,浸入展開(kāi)劑的深度為距薄層板底邊0.5—1.0cm,密封室蓋。
4. 檢測(cè):等展開(kāi)至規(guī)定距離,取出薄層板,晾干,按各品種項(xiàng)下的規(guī)定檢測(cè),如需用薄層掃描儀對(duì)色譜斑點(diǎn)作掃描檢出,或直接在薄層上對(duì)色譜斑點(diǎn)作掃描定量,則可用薄層掃描法。薄層掃描的方法,除另有規(guī)定外,可根據(jù)各種薄層掃描儀的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及使用說(shuō)明,結(jié)合具體情況,選擇吸收法或熒光法,用雙波長(zhǎng)或單波長(zhǎng)掃描。由于影響薄層掃描結(jié)果的因素很多,故應(yīng)在保證供試品的斑點(diǎn)在一定濃度范圍內(nèi)呈線(xiàn)性的情況下,將供試品與對(duì)照品在同一塊薄層上展開(kāi)后掃描,進(jìn)行比較并計(jì)算定量,以減少誤差。
注意事項(xiàng):
1. 所用玻璃板應(yīng)洗凈不掛水珠,光滑平整。
2. 鋪板要均勻,厚度適宜,并于室溫下晾干后在110℃活化30分鐘,置于有干燥劑的干燥箱或干燥器中備用。
3. 點(diǎn)樣點(diǎn)一般為圓點(diǎn),不能太大。
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