簡述實時熒光定量pcr儀的系統(tǒng)組成
【化工儀器網(wǎng) 技術指導】近期，隨著疫情的發(fā)展，人們對醫(yī)療相關的科學儀器也認識不少。其中，實時熒光定量PCR儀這個名字經(jīng)常出現(xiàn)在人們的眼前。那么，這個儀器究竟是什么呢？用來干嘛的呢？今天，小編就為大家簡單介紹一下這個設備。
實時熒光定量pcr儀，由熒光定量系統(tǒng)和計算機組成，用來監(jiān)測循環(huán)過程的熒光。與實時設備相連的計算機收集熒光數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)通過開發(fā)的實時分析軟件以圖表的形式顯示。原始數(shù)據(jù)被繪制成熒光強度相對于循環(huán)數(shù)的圖表。原始數(shù)據(jù)收集后可以開始分析。實時設備的軟件能使收集到的數(shù)據(jù)進行正常化處理來彌補背景熒光的差異。正常化后可以設定域值水平，這就是分析熒光數(shù)據(jù)的水平。
優(yōu)勢
樣品到達域值水平所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)稱為Ct值(限制點的循環(huán)數(shù))。域值應設定在使指數(shù)期的擴增效率為大，這樣可以獲得準確，可重復性的數(shù)據(jù)。如果同時擴增的還有標有相應濃度的標準品，線性回歸分析將產(chǎn)生一條標準曲線，可以用來計算未知樣品的濃度。
系統(tǒng)組成
實時熒光定量PCR儀主要由兩部分組成，一個是PCR系統(tǒng)，一個是熒光檢測系統(tǒng)。由于定量PCR必需借助樣本和標準品之間的對比來實現(xiàn)定量的，對于定量PCR系統(tǒng)來說，重要的參數(shù)除了傳統(tǒng)PCR的溫控精確性、升降溫速度等等，更重要的還在于樣品孔之間的均一性，以避免微小的差別被指數(shù)級放大。
至于熒光檢測系統(tǒng)，多色多通道檢測是當今的主流趨勢，儀器的激發(fā)通道越多，儀器適用的熒光素種類越多，儀器適用范圍就越寬；多通道指可同時檢測一個樣品中的多種熒光，儀器就可以同時檢測單管內(nèi)多模版或者內(nèi)標+樣品，通道越多，儀器適用范圍越寬、性能就更強大。
熒光檢測系統(tǒng)主要包括激發(fā)光源和檢測器。激發(fā)光源有鹵鎢燈光源、氬離子激光器、發(fā)光二極管LED光源，前者可配多色濾光鏡實現(xiàn)不同激發(fā)波長，而單色發(fā)光二極管LED價格低、能耗少、壽命長，不過因為是單色，需要不同的LED才能更好地實現(xiàn)不同激發(fā)波長。監(jiān)測系統(tǒng)有超低溫CCD成像系統(tǒng)和PMT光電倍增管，前者可以一次對多點成像，后者靈敏度高但一次只能掃描一個樣品，需要通過逐個掃描實現(xiàn)多樣品檢測，對于大量樣品來說需要較長的時間。定量PCR儀需要考慮的另外一個因素是軟件設計，這一點目前較新型號的儀器都有不錯的配套軟件可以滿足常規(guī)使用。
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