色譜柱常見問題(五)
【化工儀器網 技術指導】色譜柱是色譜的核心部件,色譜柱出問題會直接影響分析結果的準確性。了解色譜柱常見問題,助您更好的只用色譜儀。
1、拿到C18柱后會用甲醇從小流量到大流量慢慢活化,目的是什么?
進行該操作,是因為色譜柱到達用戶手中的時間長短不一,在存儲和運輸的過程中,可能存儲液有些揮發,低流速的甲醇可以很好的浸潤固定相,使鍵合相很好的伸展。用溶劑平衡好系統后,如果要更快的獲得重現的色譜圖,可以采取多次進樣或者加大進樣量的方式,這樣用樣品將色譜柱中的活化點飽和,就不會出現異常色譜現象的情況。
2、C18柱曾保存在酸性環境中,會對柱子有什么損壞嗎?
保存的酸性環境如果不含緩沖鹽,只是短期幾天保存在酸性流動相中,無需過于擔心,但可能減少幾天的使用壽命。如果有緩沖鹽,保存期間水分揮發可能會導致緩沖鹽結晶在柱內析出,對柱子損傷很大。
3、 新出廠液相色譜柱,保護溶劑一般是什么?怎樣進行平衡清洗?
根據柱子類型的不同,保存溶劑一般不一樣,具體要看說明書。一般反相柱用甲醇(乙腈)保存,也有用80%左右甲醇濃度的甲醇/水保存的。
平衡清洗時一般用流動相平衡沖洗10-20個柱體積即可。
4、色譜柱的安裝有什么技巧嗎?
色譜柱安裝技巧不多,只要接頭和柱頭匹配,確實擰緊不漏就可以了,但也要注意不要擰得太緊以至于損傷螺紋。
5、測定多肽樣品時,會出現峰前延或峰拖尾的情況,是什么原因呢?
峰前延或拖尾,一般不是色譜柱的問題,應該是樣品和色譜柱填料的作用問題。也就是說,如果色譜柱類型選擇沒錯,我們就可以關注色譜條件的選擇,如進樣量、樣品溶劑、流動相組成(包括添加劑)、流動相pH以及柱溫。另外測定分子量較大的多肽,用樣品老化平衡色譜柱很重要,分子量越大的物質,需要平衡時間越長。
6、三乙胺磷酸鹽緩沖液作流動相,柱壓越來越高該怎么樣解決?
再生柱子,比如對色譜柱進行反沖。
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