β-阿樸-8′-胡蘿卜素酸乙酯又叫阿樸胡蘿卜素酸乙酯、天然橙 7 號或阿樸酯等，是類胡蘿卜素中一種含氧的阿樸胡蘿卜素類化合物，在食品工業(yè)中主要應(yīng)用于食用油脂、人造奶油、果醬、果凍及飲品類產(chǎn)品的著色。在飼料工業(yè)中廣泛應(yīng)用于肉禽，尤其是肉雞的皮膚、腳脛、脂肪的著色以及禽類蛋黃的著色，在目標組織中沉積率較高，著色效果顯著高于β-阿樸-8′-胡蘿卜素醛及萬壽菊提取物。部分文獻表明，家禽日糧中添加一定量的β-阿樸-8′-胡蘿卜素酸乙酯可提高家禽機體免疫力，促進雛禽發(fā)育。
 

　　β-阿樸-8′-胡蘿卜素酸乙酯使用廣泛、添加混亂、檢測標準缺失、養(yǎng)殖者認知匱乏、不利監(jiān)管等問題。一是禽飼料中使用廣泛。2019年至今，貴州省獸藥飼料檢測所累計檢測11個省禽飼料 409 批，β-阿樸-8’-胡蘿卜酸乙酯檢出率 24.7%，配合飼料、濃縮飼料及添加劑預(yù)混合飼料折算為日糧含量主要在2.0～10.0mg/kg。二是添加劑中未檢出。累計檢測添加劑及混合型添加劑24批，均未檢出β-阿樸-8’-胡蘿卜酸乙酯。添加劑中添加會增加成本，在養(yǎng)殖者無需求，不會添加或添加廉價的著色劑。三是沒有法定檢測方法標準，國內(nèi)尚無飼料中β-阿樸-8′-胡蘿卜素酸乙酯含量檢測推薦性國家標準或行業(yè)標準，各級管理部門無法開展執(zhí)法檢驗；四是使用現(xiàn)狀混亂無規(guī)律。養(yǎng)殖者對添加階段、添加量、添加配比、添加時間、成色效果的使用沒有標準。因此，建立一種快速、準確測定飼料中β-阿樸-8′-胡蘿卜素酸乙酯含量的標準方法，填補技術(shù)空白，有利于行業(yè)主管部門開展飼料中著色劑規(guī)范使用監(jiān)管工作，指導(dǎo)安全、科學(xué)、綠色養(yǎng)殖，確保飼料和禽產(chǎn)品的質(zhì)量安全，引導(dǎo)社會健康消費，保障人民的身體健康，推動產(chǎn)業(yè)高質(zhì)量發(fā)展。
 

　　本文件按照GB/T 1.1-2020《標準化工作導(dǎo)則 第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。
 

　　本文件描述了飼料中β-阿樸-8′-胡蘿卜素酸乙酯的高效液相色譜測定方法。本文件適用于配合飼料、濃縮飼料、精料補充料、添加劑預(yù)混合飼料和混合型飼料添加劑中β-阿樸-8′-胡蘿卜素酸乙酯的測定。
 

　　本文件配合飼料、濃縮飼料、精料補充料中β-阿樸-8′-胡蘿卜素酸乙酯的檢出限為0.15mg/kg、定量限為0.50mg/kg，添加劑預(yù)混合飼料、混合型飼料添加劑中β-阿樸-8′-胡蘿卜素酸乙酯的檢出限為1.5mg/kg、定量限為5.0mg/kg。
 

　　原理：
 

　　試樣中β-阿樸-8′-胡蘿卜素酸乙酯經(jīng)水分散、乙醇和二氯甲烷提取、固相萃取柱凈化，用高效液相色譜儀檢測，外標法定量。
 

　　儀器設(shè)備：
 

　　1.高效液相色譜儀：配紫外檢測器或二極管陣列檢測器。
 

　　2.分析天平：感量為0.1g和0.00001g。
 

　　3.離心機：轉(zhuǎn)速不低于8000r/min。
 

　　4.超聲波清洗儀。
 

　　5.固相萃取裝置。
 

　　6.氮吹儀。
 

　　高效液相色譜參考條件：
 

　　高效液相色譜參考條件如下：
 

　　a)色譜柱：Waters Symmetry® C18柱2，柱長250mm，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5μm，或性能相當者；
 

　　b)柱溫：30℃；
 

　　c)檢測波長：445nm；
 

　　d)流動相：乙腈+甲醇= 20+80；
 

　　e)流速：1.0mL/min；
 

　　f)進樣量：20µL。
 

　　精密度：
 

　　在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過該算術(shù)平均值的10%。
 

　　更多詳情請見附件。