SF17A昆蟲細胞無血清培養基*

品名：SF17A昆蟲細胞無血清培養基

貨號：SF10105-2

規格：1L

價格：270元

產品介紹：

SF17A是一種適于昆蟲細胞培養的無血清無蛋白培養基，含有Pluronic F-68、谷氨酰胺、碳酸氫鈉。針對Sf9 、Sf21和High-Five 昆蟲細胞系的無血清培養而開發和優化，適于通過昆蟲細胞桿狀病毒表達系統表達外源蛋白，使用該培養基可獲得高滴度野生型AcNPV。細胞可以從無血清或者添加血清的培養基中直接轉移到SF17A中進行傳代培養，而無需經過適應。該培養基可以支持Sf9、Sf21和High-Five 細胞貼壁或者懸浮生長。Sf9 、Sf21和High-Five 細胞在SF17A培養基中通常可以達到1×10 7 cells/ml 的細胞密度，細胞活性大于95%，傳代超過20 次而細胞活性不降低。

細胞復蘇：

1.迅速將凍存的細胞放入37 度水浴中（<1min）。

2.將凍存管中的細胞轉移到合適的培養容器中，用預熱過的培養基將細胞稀釋至0.5～0.8×106 cells/ml。

3.將細胞放入生化培養箱（無濕度、二氧化碳控制）中的搖床上，27±0.5°C ，90～120 rpm。

4.當細胞密度達到2×106 cells/ml 以上時進行傳代培養。建議在蛋白或者病毒制備前細胞應至少傳代三次以上。

細胞懸浮培養傳代

昆蟲細胞對剪切力非常敏感，必須保證攪拌培養過程中槳葉不能與容器壁或者容器底部接觸。

1.使用自動或者半自動細胞計數儀，或者手動計數的方法測定細胞密度。

2.向無菌容器中加入預熱的培養基，將細胞按照0.5～0.8×106 cells/ml 的密度接種其中（125ml 的搖瓶可以接種20～30 ml，100 ml 的轉瓶（spinner bottle）可以接種50～75 ml）。

3.培養箱溫度27±0.5°C ，不需要濕度和二氧化碳控制。

4.搖床轉速90-120 rpm，轉瓶攪拌轉速設定為60～95 rpm（因儀器參數不同，建議在培養時對轉速進行優

化）。

5.當細胞密度達到2×106 cells/ml 以上時，可以進行傳代。

注意：如果觀察到培養物中有細胞碎片，建議將細胞懸液100 g 離心5～10 min，棄上清，用新鮮培養基將細胞重懸，這樣可減少細胞碎片和代謝副產物的積累。

注意：建議控制細胞培養代次，每隔一段時間需要重新復蘇一支低代次的細胞

細胞貼壁培養傳代

1.當細胞達到80~90%匯合度時，將培養上清去除。

2.添加4 mL 預熱培養基（25 cm2），反復吹打制備細胞懸液。

3.觀察細胞是否全部脫落。

4.如果部分細胞結團，將全部細胞轉移到離心管中，靜止1~2 min，細胞團會沉降到離心管的底部。用槍頭輕輕碾壓細胞團促使細胞分散。如果細胞團比較大，可以重以上步驟。用槍頭吹打過重會造成細胞活性降低。

5.計數細胞密度。

6.按照2~8×104 cells/cm2 的密度接種到新培養瓶中，培養基按照5 mL/cm2 的量進行添加。

7.置于生化培養箱中培養，27±0.5°C ，不需要濕度和二氧化碳控制。

8.培養三天后將培養上清去除，靠近方瓶一側將新鮮培養基緩慢添加到方瓶中。

注意：Sf9 細胞為非貼壁依賴型細胞，可以在貼壁培養和懸浮培養兩種培養模式之間進行多次轉換，而且細胞活性、形態和生長速率基本無區別。

將細胞適應至SF17A培養基中，在適應過程中，細胞活性非常重要，必須不低于90%，并處于對數生長中期。

直接懸浮適應

單層培養的細胞，只需要在傳代時直接將培養基更換為SF17A。

按照以下步驟將懸浮培養的細胞轉移至該培養基中：

1.將細胞懸液100×g 離心5～10 min，將上清去除。

2.使用預熱過的SF17A培養基將細細胞重懸，細胞密度不低于8×105 cells/mL，轉移至合適的容器中進行

培養。

3.置于培養箱中進行培養，監測細胞生長情況。

逐步適應

按照貼壁培養或懸浮培養傳代方法和以下方法進行逐步適應。

1.在適應過程中細胞密度不低于0.8×106 cells/mL。

2.在傳代培養過程中逐步增加SF17A培養基的比例，SF17A培養基與初始培養基的比例逐漸升高（25:75，

50:50，75:25，全部的SF17A）。在某個比例培養基中進行培養有可能要多次傳代培養。

細胞凍存

1.準備處于對數生長中期的細胞，細胞活性>90%。

2.確定需要的細胞數量和凍存液體積，凍存液中細胞密度應達到0.5～1.0 × 107 cells/ml。

3.凍存液由82.5%SF17A，7.5% DMSO，10% 胎牛血清組成（血清也可以不添加）。凍存液4°C 保存。

4.將培養物100 g 離心6 min，去除上清，使用凍存液重懸細胞。

5.根據培養規模將細胞分裝于合適的凍存管中，如4.5 ml～5.0 ml/支。

6.細胞可以在液氮中長期穩定保存，但不確定長保存期限。

SF17A昆蟲細胞無血清培養基*貨號及規格：

液體：

SF17A培養基，1L 液體，SF10105-2__