氨芐青霉素快速檢測試劑盒說明書
- 公司名稱 上海研謹(jǐn)生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
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- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時間 2020/11/20 9:43:18
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公司主營: 各種實(shí)驗(yàn)代做:WB代做,免疫組化,PCR代做,細(xì)胞檢測,食品安全檢測試劑,獸藥殘留檢測試劑,動物疫病類檢測,銷售高品質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品,對照品,ELISA試劑盒,細(xì)胞,血清,等等
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,食品,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
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主要用途 | 檢測殘留物氨芐青霉素的含量。 |
氨芐青霉素快速檢測試劑盒說明書
一、原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物氨芐青霉素將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗氨芐青霉素抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物氨芐青霉素的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物氨芐青霉素的含量。
二、試劑盒特性
試劑盒靈敏度: 0.1ppb
孵育溫度: 25℃
孵育時間: 30min~30min~15min
樣本檢測下限
組織、蜂蜜、牛奶 2ppb
蜂蜜、牛奶樣本因存在一定的干擾,定量檢測下限為4ppb
u交叉反應(yīng)率
氨芐青霉素 100%
青 霉 素 0.8%
鄰氯青霉素 0.2%
雙氯青霉素 0.1%
阿莫西林 0.1%
頭孢塞呋 0.1%
樣本回收率
組 織 75±19%
蜂蜜 、牛奶 70±17%
三、試劑盒組成
1、微量測試孔:每條8孔,一板12條
2、標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶(1ml/瓶): 0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb
3、酶標(biāo)記物 12ml 紅色帽
4、抗體工作液 7ml 藍(lán)色帽
5、底物A液 7ml 白色帽
6、底物B液 7ml 黑色帽
7、終止液 7ml 黃色帽
8、20X濃縮洗滌液 40ml 白色帽
9、5X濃縮復(fù)溶液 50ml 透明帽
四、所用儀器、試劑
具備的儀器:酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)、氮吹儀、刻度移液管
微量移液器:單道 20µl~200µl、單道100µl~1000µl、多道 30~300 µl
試 劑:氫氧化鈉、乙腈、正己烷、亞硝基鐵氰化na、硫酸鋅
五、樣本前處理步驟
樣本處理前須知
(a)實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭。
(b)實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈,必要時可對實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
樣本前處理需配制:
配液1 C液(牛奶、奶粉樣本):
10.7g 亞硝基鐵氰化na加去離子水100ml溶解。
配液2 D液(牛奶、奶粉樣本):
28.8g硫酸鋅加去離子水100ml溶解。
配液3 0.1M NaOH溶液
0.4gNaOH加去離子水100ml溶解。
配液4 乙腈-0.1M NaOH溶液
84ml乙腈16ml 0.1M NaOH混合均勻
配液5 樣本復(fù)溶液:
將5X濃縮復(fù)溶液用去離子水按1:4稀釋。
配液6 1M NaOH溶液
4g NaOH加去離子水100ml溶解
樣本處理:
(a)組織(雞、鴨、豬肉/豬肝、蝦、魚)樣本處理方法
1、稱取2±0.05g均質(zhì)后樣本于50ml離心管中,加入2ml 1M NaOH溶液,渦旋2min,再加入8ml乙腈振蕩5min,室溫4000r/min以上離心10min;
2、取出1ml上清液,在56℃條件下氮?dú)饣蚩諝饬鞔抵?干燥;
3、加入1 ml樣本復(fù)溶液溶解干燥殘留物,混合30s;將溶解后的樣本液按1:3(50µl樣本液加150µl樣本復(fù)溶液)稀釋,混合30s;
4、取50 µl用于分析
樣本稀釋倍數(shù): 20倍
(b)蜂蜜處理方法
1、準(zhǔn)確稱取1±0.05g蜂蜜樣本于離心管中,加入3ml 樣本復(fù)溶液,振蕩混勻后靜置20min;室溫4000r/min 以上離心10min;
2、取上層液體用樣本復(fù)溶液按1:4(20µl樣本液+80µl稀釋后的復(fù)溶液)稀釋,混合30s;
3、取50µl用于分析
樣本稀釋倍數(shù): 20倍
(c) 牛奶樣本處理方法一
1、取2ml鮮牛奶于5ml離心管,加入50µlC液混勻;
2、加入50 µl D液振蕩1min,10℃ 4000r/min以上離心10min;
3、取上層清亮液體用樣本復(fù)溶液按1: 19(20µl樣本液+380µl樣本復(fù)溶液)稀釋,混合30s;
4、取50µl用于分析。
樣本稀釋倍數(shù):20
注:如果離心后仍然渾濁,再重復(fù)沉淀過程。
(d)牛奶樣本處理方法二
1、取2ml去除脂肪奶樣至離心管中;
2、加入8ml乙腈-0.1M NaOH充分振蕩2min,15℃ 4000r/min以上離心10min,取1ml上清液,在56℃條件下氮?dú)饣蚩諝饬鞔抵?干燥;
3、用1ml正己烷溶解干燥的殘留物后,再加入1ml樣本復(fù)溶液混合30s,離心去除正己烷相;
4、取下層相用樣本復(fù)溶液按1:3 (50µl樣本液加150µl稀釋后的復(fù)溶液)稀釋,混合30s;
5、取50µl用于分析。
樣本稀釋倍數(shù): 20倍
六、 酶標(biāo)免疫分析程序:
u測定前應(yīng)須知:
1、使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(20~25℃)。
2、使用之后立即將所有試劑放回2~8℃。
3、在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的*性,正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點(diǎn)。
4、所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。
操作步驟:
1、從2~8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(20~25℃)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于2-8℃。
3、配液:將40ml 20X濃縮洗滌液用去離子水稀釋至800ml。
4、編號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加加入抗體工作液50µl/孔,用蓋板膜封板,輕輕振蕩混勻。25℃環(huán)境中反應(yīng)30min。
6、將孔內(nèi)液體甩干,用已稀釋的洗滌液250µl/孔洗板4~5次,每次間隔15~30秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
7、每孔加入酶標(biāo)記物100µl,蓋板膜蓋板后置25℃環(huán)境中反應(yīng)30min。將孔內(nèi)液體甩干,用洗滌液充分洗,4~5遍(同上),用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
8、顯色:加入底物A液50µl/孔,再加入底物B液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境中避光顯色15min。
9、測定:加入終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,5min內(nèi)讀數(shù)),測定每孔OD值。
七、結(jié)果判定
結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含氨芐青霉素量成負(fù)相關(guān)。
1、粗略判定:
用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb為2.243; 0.1ppb為1.816;0.3ppb為1.415;0.9ppb為0.74;2.7ppb為0.313;8.1ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb~8.1ppb;樣本2的濃度范圍是0.3ppb~0.9ppb,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氨芐青霉素實(shí)際濃度。
2、定量分析
(1)百分吸光率的計(jì)算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以*個標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以100%,即
百分吸光度值(%)= B ×100%
B0
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以氨芐青霉素標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氨芐青霉素實(shí)際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。八、 注意事項(xiàng)
1、室溫低于25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫(20~25℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
3、混合要均勻,否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
4、反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號的盒中試劑。
6、不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
7、顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品1的吸光度值小于0.5時,表示試劑可能變質(zhì)。
8、該試劑盒理想反應(yīng)溫度為25℃,溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
九、儲藏條件和保質(zhì)期
1、儲藏條件:試劑盒于2-8℃保存,不要冷凍。
2、保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。
提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,請放心使用。