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氨芐青霉素快速檢測試劑盒說明書

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上海研謹(jǐn)生物科技有限公司提供RT-PCR技術(shù)服務(wù)、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)服務(wù)、原位雜交技術(shù)服務(wù)、免疫沉淀技術(shù)服務(wù)、Western Blotting技術(shù)服務(wù)、PCR實(shí)驗(yàn)服務(wù),并為廣大科研用戶提供各種高品質(zhì)的化學(xué)試劑、生物學(xué)試劑、免疫學(xué)檢測,ELISA試劑盒、生化試劑盒、分析標(biāo)準(zhǔn)品、對照品、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、食品安全檢測試劑、動物疫病類檢測產(chǎn)品、獸藥殘留檢測試劑、細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù)等,應(yīng)用覆蓋藥物分析領(lǐng)域、食品安全領(lǐng)域、聚合物研究領(lǐng)域、環(huán)境監(jiān)測領(lǐng)域,客戶廣泛分布于食品、制藥、第三方檢測、環(huán)境測試機(jī)構(gòu)、化工、科研院校、生物工程等行業(yè)。

主營:

1生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品對照品、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、

2.ELISA試劑盒、分離液、分離液試劑盒

3.細(xì)胞:*細(xì)胞、國產(chǎn)腫瘤細(xì)胞、國產(chǎn)正常細(xì)胞、腫瘤耐藥細(xì)胞

4.食品安全檢測試劑、動物疫病類檢測產(chǎn)品、獸藥殘留檢測試劑

5.耗材:常用實(shí)驗(yàn)耗材、移液器


公司主營: 各種實(shí)驗(yàn)代做:WB代做,免疫組化,PCR代做,細(xì)胞檢測,食品安全檢測試劑,獸藥殘留檢測試劑,動物疫病類檢測,銷售高品質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品,對照品,ELISA試劑盒,細(xì)胞,血清,等等

供貨周期 現(xiàn)貨 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,食品,化工,生物產(chǎn)業(yè)
主要用途 檢測殘留物氨芐青霉素的含量。

氨芐青霉素快速檢測試劑盒說明書

 

 

一、原理

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物氨芐青霉素將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗氨芐青霉素抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物氨芐青霉素的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物氨芐青霉素的含量。

二、試劑盒特性

試劑盒靈敏度:   0.1ppb

孵育溫度:       25℃

孵育時間:       30min~30min~15min

樣本檢測下限

組織、蜂蜜、牛奶                     2ppb

蜂蜜、牛奶樣本因存在一定的干擾,定量檢測下限為4ppb

u交叉反應(yīng)率

氨芐青霉素                           100%

青 霉 素                              0.8%

鄰氯青霉素                            0.2%

雙氯青霉素                            0.1%

阿莫西林                              0.1%

頭孢塞呋                              0.1%

樣本回收率

組  織                               75±19%

蜂蜜 、牛奶                          70±17%

三、試劑盒組成

1、微量測試孔:每條8孔,一板12條

2、標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶(1ml/瓶): 0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb

3、酶標(biāo)記物    12ml                 紅色帽

4、抗體工作液  7ml                  藍(lán)色帽

5、底物A液   7ml                   白色帽

6、底物B液   7ml                   黑色帽

7、終止液     7ml                   黃色帽

8、20X濃縮洗滌液   40ml            白色帽

9、5X濃縮復(fù)溶液    50ml            透明帽

四、所用儀器、試劑

具備的儀器:酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)、氮吹儀、刻度移液管

微量移液器:單道 20µl~200µl、單道100µl~1000µl、多道 30~300 µl

試      劑:氫氧化鈉、乙腈、正己烷、亞硝基鐵氰化na、硫酸鋅

五、樣本前處理步驟

樣本處理前須知

(a)實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭。

(b)實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈,必要時可對實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

樣本前處理需配制:

配液1   C液(牛奶、奶粉樣本):

 10.7g 亞硝基鐵氰化na加去離子水100ml溶解。

配液2   D液(牛奶、奶粉樣本):

28.8g硫酸鋅加去離子水100ml溶解。

配液3  0.1M NaOH溶液

0.4gNaOH加去離子水100ml溶解。

配液4  乙腈-0.1M NaOH溶液

84ml乙腈16ml 0.1M NaOH混合均勻

配液5  樣本復(fù)溶液:

將5X濃縮復(fù)溶液用去離子水按1:4稀釋。

配液6  1M NaOH溶液

        4g NaOH加去離子水100ml溶解

樣本處理:

(a)組織(雞、鴨、豬肉/豬肝、蝦、魚)樣本處理方法

1、稱取2±0.05g均質(zhì)后樣本于50ml離心管中,加入2ml 1M NaOH溶液,渦旋2min,再加入8ml乙腈振蕩5min,室溫4000r/min以上離心10min;

2、取出1ml上清液,在56℃條件下氮?dú)饣蚩諝饬鞔抵?干燥;

3、加入1 ml樣本復(fù)溶液溶解干燥殘留物,混合30s;將溶解后的樣本液按1:3(50µl樣本液加150µl樣本復(fù)溶液)稀釋,混合30s;

4、取50 µl用于分析

樣本稀釋倍數(shù):  20倍

(b)蜂蜜處理方法

1、準(zhǔn)確稱取1±0.05g蜂蜜樣本于離心管中,加入3ml 樣本復(fù)溶液,振蕩混勻后靜置20min;室溫4000r/min 以上離心10min;

2、取上層液體用樣本復(fù)溶液按1:4(20µl樣本液+80µl稀釋后的復(fù)溶液)稀釋,混合30s;

3、取50µl用于分析

樣本稀釋倍數(shù):  20倍

(c) 牛奶樣本處理方法一

1、取2ml鮮牛奶于5ml離心管,加入50µlC液混勻;

2、加入50 µl D液振蕩1min,10℃ 4000r/min以上離心10min;

3、取上層清亮液體用樣本復(fù)溶液按1: 19(20µl樣本液+380µl樣本復(fù)溶液)稀釋,混合30s;

4、取50µl用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):20

注:如果離心后仍然渾濁,再重復(fù)沉淀過程。

(d)牛奶樣本處理方法二

1、取2ml去除脂肪奶樣至離心管中;

2、加入8ml乙腈-0.1M NaOH充分振蕩2min,15℃ 4000r/min以上離心10min,取1ml上清液,在56℃條件下氮?dú)饣蚩諝饬鞔抵?干燥;

3、用1ml正己烷溶解干燥的殘留物后,再加入1ml樣本復(fù)溶液混合30s,離心去除正己烷相;

4、取下層相用樣本復(fù)溶液按1:3 (50µl樣本液加150µl稀釋后的復(fù)溶液)稀釋,混合30s;

5、取50µl用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):  20倍

六、 酶標(biāo)免疫分析程序:

u測定前應(yīng)須知:

1、使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(20~25℃)。

2、使用之后立即將所有試劑放回2~8℃。

3、在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的*性,正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點(diǎn)。

4、所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。

操作步驟:

1、從2~8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(20~25℃)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2、取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于2-8℃。

3、配液:將40ml 20X濃縮洗滌液用去離子水稀釋至800ml。

4、編號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加加入抗體工作液50µl/孔,用蓋板膜封板,輕輕振蕩混勻。25℃環(huán)境中反應(yīng)30min。

6、將孔內(nèi)液體甩干,用已稀釋的洗滌液250µl/孔洗板4~5次,每次間隔15~30秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。

7、每孔加入酶標(biāo)記物100µl,蓋板膜蓋板后置25℃環(huán)境中反應(yīng)30min。將孔內(nèi)液體甩干,用洗滌液充分洗,4~5遍(同上),用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。

8、顯色:加入底物A液50µl/孔,再加入底物B液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境中避光顯色15min。

9、測定:加入終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,5min內(nèi)讀數(shù)),測定每孔OD值。

七、結(jié)果判定

結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含氨芐青霉素量成負(fù)相關(guān)。

1、粗略判定:

用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb為2.243; 0.1ppb為1.816;0.3ppb為1.415;0.9ppb為0.74;2.7ppb為0.313;8.1ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb~8.1ppb;樣本2的濃度范圍是0.3ppb~0.9ppb,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氨芐青霉素實(shí)際濃度。

2、定量分析

(1)百分吸光率的計(jì)算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以*個標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以100%,即

百分吸光度值(%)= B ×100%

 B0

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以氨芐青霉素標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氨芐青霉素實(shí)際濃度。

若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。八、 注意事項(xiàng)

1、室溫低于25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫(20~25℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。

2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

3、混合要均勻,否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。

4、反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。

5、不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號的盒中試劑。

6、不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。

7、顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品1的吸光度值小于0.5時,表示試劑可能變質(zhì)。

8、該試劑盒理想反應(yīng)溫度為25℃,溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

九、儲藏條件和保質(zhì)期

1、儲藏條件:試劑盒于2-8℃保存,不要冷凍。

2、保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,請放心使用。

 

 

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