酵母蛋白表達系統(tǒng)
- 公司名稱 安諾倫(北京)生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號
- 產(chǎn)地 北京
- 廠商性質(zhì) 代理商
- 更新時間 2020/5/22 14:05:08
- 訪問次數(shù) 1964
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酵母蛋白表達系統(tǒng)介紹
畢赤酵母(Pichia pastoris)表達系統(tǒng)是近年來發(fā)展迅速、應(yīng)用廣泛的一種真核表達系統(tǒng)。它是甲醇營養(yǎng)型酵母菌,有兩個乙醇氧化酶(Alcohol oxidase, AOX)編碼基因AOX1和AOX2,兩種序列相似,AOX1基因嚴格受甲醇誘導(dǎo)和調(diào)控。當(dāng)甲醇為碳源時,AOX1啟動子可被甲醇誘導(dǎo),啟動乙醇氧化酶的表達,從而用甲醇進行代謝,含AOX1啟動子的質(zhì)粒可用來促進編碼外源蛋白的目的基因的表達。
表達菌株特點
GS115:AOX1和AOX2基因都正常表達AOX蛋白(乙醇氧化酶),甲醇的利用率高,接近于野生型,屬于甲醇快速利用型(Mut+)
KM71:AOX1基因被大部分剔除,只能利用AOX2為AOX編碼,甲醇的利用速率變慢,表現(xiàn)為甲醇慢利用型(Muts)
外源基因的整合方式不同會導(dǎo)致表達菌株的表型不同:
菌株表型
酵母蛋白表達系統(tǒng)常用表達載體及篩選標(biāo)記
載體信息
信號肽
對于胞外表達的蛋白除了可以用載體自帶的信號肽,還有以下信號肽可供選擇:
信號肽序列
畢赤酵母表達系統(tǒng)的優(yōu)勢
1. 含有*的強有力的AOX(醇氧化酶基因)啟動子,用甲醇可嚴格地調(diào)控外源基因的表達。
2. 培養(yǎng)成本低,產(chǎn)物易分離,畢赤酵母所用發(fā)酵培養(yǎng)基成本合理,一般碳源為甘油或葡萄糖及甲醇,其余為無機鹽,培養(yǎng)基中不含蛋白,有利于下游產(chǎn)品分離純化。
3. 外源蛋白基因遺傳穩(wěn)定,外源基因能以高拷貝數(shù)整合到畢赤酵母基因組中,不易丟失并能得到高表達菌株。
4. 作為真核表達系統(tǒng),畢赤酵母具有真核生物的亞細胞結(jié)構(gòu),具有糖基化、脂肪酰化、蛋白磷酸化等翻譯后修飾加工功能。
艾柏森生物酵母表達系統(tǒng)的優(yōu)勢
1. 具備完備的畢赤酵母表達平臺,可以根據(jù)蛋白特性或客戶的需求設(shè)計不同的實驗方案;
2. 具有高通量的篩選平臺,可以快速有效的得到好的表達條件;
3. 具有大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)能力
服務(wù)組合
經(jīng)典案例
表達載體pPIC3.5K(胞內(nèi)表達),目的蛋白32.49KD(理論值)
表達菌株:GS115/KM71
誘導(dǎo)條件:甲醇濃度0.5%/1%,誘導(dǎo)時間24h/48/72h
結(jié)果分析:從SDS-PAGE膠圖中可以看到,目的蛋白(糖基化后40KDa左右)有明顯表達,其中GS115-5#-24h,0.5%甲醇,GS115-2#-48h,1%甲醇,GS115-3#-48h,01%甲醇,KM71-1#-72h,1%甲醇,都有很明顯的目的條帶,目的蛋白成功表達。