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2D-WB 蛋白雙向 電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)

具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 公司名稱 上海研謹(jǐn)生物科技有限公司
  • 品牌 其他品牌
  • 型號(hào) 2D-WB
  • 產(chǎn)地
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間 2023/10/27 11:11:05
  • 訪問(wèn)次數(shù) 3682

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   公司承接各種實(shí)驗(yàn)代做外包服務(wù):石蠟包埋、免疫組化、HE染色、PAS染色、DNA提取、RNA提取、探針、SNP檢測(cè)、WBEMSACCK8檢測(cè)、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期檢測(cè)、流式、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、ROS活性氧檢測(cè)、線粒體膜電位檢測(cè)、平板克隆、軟瓊脂克隆、細(xì)胞劃痕、細(xì)胞粘附,并為廣大科研用戶提供各種高品質(zhì)的高*_端化學(xué)試劑、生物學(xué)試劑、免疫學(xué)檢測(cè),ELISA試劑盒(免費(fèi)代測(cè))、生化試劑盒、分析標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)食品安全檢測(cè)試劑、動(dòng)物疫病類檢測(cè)產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)試劑、細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù)等,應(yīng)用覆蓋藥物分析領(lǐng)域、食品安全領(lǐng)域、聚合物研究領(lǐng)域、環(huán)境監(jiān)測(cè)領(lǐng)域,客戶廣泛分布于食品、制藥、第三方檢測(cè)、環(huán)境測(cè)試機(jī)構(gòu)、化工、科研院校、生物工程等行業(yè)。


主營(yíng):

1生化試劑標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

2.ELISA試劑盒、分離液、分離液試劑盒

3.細(xì)胞:*細(xì)胞、國(guó)產(chǎn)腫瘤細(xì)胞、國(guó)產(chǎn)正常細(xì)胞、腫瘤耐藥細(xì)胞

4.食品安全檢測(cè)試劑、動(dòng)物疫病類檢測(cè)產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)試劑

5.耗材:常用實(shí)驗(yàn)耗材、移液器


各種實(shí)驗(yàn)代做:WB代做,免疫組化,PCR代做,細(xì)胞檢測(cè),食品安全檢測(cè)試劑,獸藥殘留檢測(cè)試劑,動(dòng)物疫病類檢測(cè),銷售高品質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品,對(duì)照品,ELISA試劑盒,細(xì)胞,血清,等等

產(chǎn)地類別 國(guó)產(chǎn) 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)


一、蛋白雙向 電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)實(shí)驗(yàn)技術(shù)簡(jiǎn)介

2D-WB是雙向電泳與傳統(tǒng)western blot結(jié)合而成的一項(xiàng)技術(shù)。一般實(shí)驗(yàn)流程 為抗原蛋白混合物先經(jīng)雙向電泳分離,然后將凝膠蛋白轉(zhuǎn)印至支持膜上,再通過(guò)抗體雜交顯色。2D-WB技術(shù)可以檢測(cè)到抗原等電點(diǎn)或分子量發(fā)生的微小變化,在蛋白翻譯后修飾的研究中有很好的應(yīng)用;而2D-WB結(jié)合質(zhì)譜鑒定技術(shù),可以從蛋白混合物中找到免疫原性更強(qiáng)的抗原。

二、蛋白雙向 電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)概述

2D-WB是雙向電泳與傳統(tǒng)western blot結(jié)合而成的一項(xiàng)技術(shù)。一般實(shí)驗(yàn)流程 為抗原蛋白混合物先經(jīng)雙向電泳分離,然后將凝膠蛋白轉(zhuǎn)印至支持膜上,再通過(guò)抗體雜交顯色。2D-WB技術(shù)可以檢測(cè)到抗原等電點(diǎn)或分子量發(fā)生的微小變化,在蛋白翻譯后修飾的研究中有很好的應(yīng)用;而2D-WB結(jié)合質(zhì)譜鑒定技術(shù),可以從蛋白混合物中找到免疫原性更強(qiáng)的抗原。

三、服務(wù)內(nèi)容

1、蛋白質(zhì)抽提與定量;

2、雙向電泳;

3、轉(zhuǎn)膜,封閉,孵育,顯示成像。

四、實(shí)驗(yàn)操作流程

1、第--項(xiàng)電泳(IEF) ,膠條平衡,第二項(xiàng)電泳SDS-APGE.

2、第二項(xiàng)電泳結(jié)束后,取出凝膠進(jìn)行轉(zhuǎn)膜,轉(zhuǎn)膜方法可選擇濕法轉(zhuǎn)移和半干法轉(zhuǎn)移。常用的膜是NC膜和PVDF膜。

3、封閉,5%脫脂奶粉或5% BSA封閉1小時(shí)(室溫)或過(guò)夜(4度)。

4、一抗孵育,根據(jù)抗體說(shuō)明書選擇孵育時(shí)間,常規(guī)的孵育條件是室溫1小時(shí)或4度過(guò)夜,一抗孵育后取出膜

TBST洗滌3次,每次5分鐘。

5、二抗孵育:根據(jù)一抗選擇合適的二抗(抗鼠、抗人、抗兔等),室溫孵育1小時(shí)后取出膜TBST洗滌3次,每次5分鐘。

6、顯影:將A、B底物按比例稀釋混臺(tái)均勻后滴在膜上,暗室中將膠片置于膜上,蓋上壓片夾,曝光一定時(shí)間后將膠片放入顯影液中進(jìn)行顯影,直到出現(xiàn)清晰的蛋白質(zhì)條帶,清水漂洗一下后在定影液中定影, 曝光時(shí)間需綜臺(tái)考慮蛋白質(zhì)的上樣量,抗體稀釋濃度,抗體孵育時(shí)間等因素。

7、定影后,清洗膠片,晾干,標(biāo)定marker,掃描圖片和2D Western blot圖片分析。

送樣須知,為了保證2D Western blot技術(shù)服務(wù)能順利進(jìn)行,樣品寄送需滿足以下要求:

1、顧客提供:組織、細(xì)胞、蛋白質(zhì)溶液等; 一抗(可交由研謹(jǐn)公司代購(gòu))。

2、運(yùn)輸要求:干冰或液氮包裝寄送。

注:樣本應(yīng)避免各類污染和反復(fù)凍融。

五、技術(shù)服務(wù)報(bào)告內(nèi)容

1、蛋白質(zhì)定量結(jié)果及電泳上樣量;

2、原始膠片、電子圖片及圖片分析結(jié)果;

3、2D Western blot完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告,包括實(shí)驗(yàn)步驟、使用儀器和試劑等。

附: 2D Western blot實(shí)驗(yàn)步驟

1、2D Western blot蛋白質(zhì)樣本制備,制備的主要原則是盡可能溶解全部蛋白質(zhì),破壞蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)間的相互作用,避免各類干擾物質(zhì),樣品制備與IEF兼容等。

2、雙向電泳的主要步驟,第-項(xiàng)電(IEF) ,膠條平衡,第二項(xiàng)電泳SDS-APGE.

3、第二項(xiàng)電泳結(jié)束后,取出凝膠進(jìn)行轉(zhuǎn)膜,轉(zhuǎn)膜方法可選擇濕法轉(zhuǎn)移和半干法轉(zhuǎn)移。常用的膜是NC膜和PVDF膜。

4、封閉, 5%脫脂奶粉或5% BSA封閉1小時(shí)(室溫)或過(guò)夜(4度)。

5、-抗孵育,根據(jù)抗體說(shuō)明書選擇孵育時(shí)間,常規(guī)的孵育條件是室溫1小時(shí)或4度過(guò)夜,一 抗孵育后取出膜TBST洗滌3次,每次5分鐘。

6、二抗孵育:根據(jù)-抗選擇合適的二抗(抗鼠、抗人抗兔等), 室溫孵育1小時(shí)后取出膜TBST洗滌3次,每次5分鐘。

7、顯影:將A、B底物按比例稀釋混合均勻后滴在膜上,暗室中將膠片置于膜上,蓋上壓片夾,曝光一定時(shí)間后將膠片放入顯影液中進(jìn)行顯影,直到出現(xiàn)清晰的蛋白質(zhì)條帶,清水漂洗一下后在定影液中定影, 曝光時(shí)間需綜合考慮蛋白質(zhì)的.上樣量,抗體稀釋濃度,抗體孵育時(shí)間等因素。

8、定影后,清洗膠片,晾干,標(biāo)定marker,掃描圖片和2D Western blot圖片分析。

2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包及論文潤(rùn)色服務(wù),協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色十多年,是您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無(wú)法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

 

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