2D-WB 蛋白雙向 電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)
- 公司名稱 上海研謹(jǐn)生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào) 2D-WB
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2023/10/27 11:11:05
- 訪問(wèn)次數(shù) 3682
聯(lián)系方式:楊小姐13585717991 查看聯(lián)系方式
聯(lián)系我們時(shí)請(qǐng)說(shuō)明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!
各種實(shí)驗(yàn)代做:WB代做,免疫組化,PCR代做,細(xì)胞檢測(cè),食品安全檢測(cè)試劑,獸藥殘留檢測(cè)試劑,動(dòng)物疫病類檢測(cè),銷售高品質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品,對(duì)照品,ELISA試劑盒,細(xì)胞,血清,等等
產(chǎn)地類別 | 國(guó)產(chǎn) | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
---|
一、蛋白雙向 電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)實(shí)驗(yàn)技術(shù)簡(jiǎn)介
2D-WB是雙向電泳與傳統(tǒng)western blot結(jié)合而成的一項(xiàng)技術(shù)。一般實(shí)驗(yàn)流程 為抗原蛋白混合物先經(jīng)雙向電泳分離,然后將凝膠蛋白轉(zhuǎn)印至支持膜上,再通過(guò)抗體雜交顯色。2D-WB技術(shù)可以檢測(cè)到抗原等電點(diǎn)或分子量發(fā)生的微小變化,在蛋白翻譯后修飾的研究中有很好的應(yīng)用;而2D-WB結(jié)合質(zhì)譜鑒定技術(shù),可以從蛋白混合物中找到免疫原性更強(qiáng)的抗原。
二、蛋白雙向 電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)概述
2D-WB是雙向電泳與傳統(tǒng)western blot結(jié)合而成的一項(xiàng)技術(shù)。一般實(shí)驗(yàn)流程 為抗原蛋白混合物先經(jīng)雙向電泳分離,然后將凝膠蛋白轉(zhuǎn)印至支持膜上,再通過(guò)抗體雜交顯色。2D-WB技術(shù)可以檢測(cè)到抗原等電點(diǎn)或分子量發(fā)生的微小變化,在蛋白翻譯后修飾的研究中有很好的應(yīng)用;而2D-WB結(jié)合質(zhì)譜鑒定技術(shù),可以從蛋白混合物中找到免疫原性更強(qiáng)的抗原。
三、服務(wù)內(nèi)容
1、蛋白質(zhì)抽提與定量;
2、雙向電泳;
3、轉(zhuǎn)膜,封閉,孵育,顯示成像。
四、實(shí)驗(yàn)操作流程
1、第--項(xiàng)電泳(IEF) ,膠條平衡,第二項(xiàng)電泳SDS-APGE.
2、第二項(xiàng)電泳結(jié)束后,取出凝膠進(jìn)行轉(zhuǎn)膜,轉(zhuǎn)膜方法可選擇濕法轉(zhuǎn)移和半干法轉(zhuǎn)移。常用的膜是NC膜和PVDF膜。
3、封閉,5%脫脂奶粉或5% BSA封閉1小時(shí)(室溫)或過(guò)夜(4度)。
4、一抗孵育,根據(jù)抗體說(shuō)明書選擇孵育時(shí)間,常規(guī)的孵育條件是室溫1小時(shí)或4度過(guò)夜,一抗孵育后取出膜
TBST洗滌3次,每次5分鐘。
5、二抗孵育:根據(jù)一抗選擇合適的二抗(抗鼠、抗人、抗兔等),室溫孵育1小時(shí)后取出膜TBST洗滌3次,每次5分鐘。
6、顯影:將A、B底物按比例稀釋混臺(tái)均勻后滴在膜上,暗室中將膠片置于膜上,蓋上壓片夾,曝光一定時(shí)間后將膠片放入顯影液中進(jìn)行顯影,直到出現(xiàn)清晰的蛋白質(zhì)條帶,清水漂洗一下后在定影液中定影, 曝光時(shí)間需綜臺(tái)考慮蛋白質(zhì)的上樣量,抗體稀釋濃度,抗體孵育時(shí)間等因素。
7、定影后,清洗膠片,晾干,標(biāo)定marker,掃描圖片和2D Western blot圖片分析。
送樣須知,為了保證2D Western blot技術(shù)服務(wù)能順利進(jìn)行,樣品寄送需滿足以下要求:
1、顧客提供:組織、細(xì)胞、蛋白質(zhì)溶液等; 一抗(可交由研謹(jǐn)公司代購(gòu))。
2、運(yùn)輸要求:干冰或液氮包裝寄送。
注:樣本應(yīng)避免各類污染和反復(fù)凍融。
五、技術(shù)服務(wù)報(bào)告內(nèi)容
1、蛋白質(zhì)定量結(jié)果及電泳上樣量;
2、原始膠片、電子圖片及圖片分析結(jié)果;
3、2D Western blot完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告,包括實(shí)驗(yàn)步驟、使用儀器和試劑等。
附: 2D Western blot實(shí)驗(yàn)步驟
1、2D Western blot蛋白質(zhì)樣本制備,制備的主要原則是盡可能溶解全部蛋白質(zhì),破壞蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)間的相互作用,避免各類干擾物質(zhì),樣品制備與IEF兼容等。
2、雙向電泳的主要步驟,第-項(xiàng)電(IEF) ,膠條平衡,第二項(xiàng)電泳SDS-APGE.
3、第二項(xiàng)電泳結(jié)束后,取出凝膠進(jìn)行轉(zhuǎn)膜,轉(zhuǎn)膜方法可選擇濕法轉(zhuǎn)移和半干法轉(zhuǎn)移。常用的膜是NC膜和PVDF膜。
4、封閉, 5%脫脂奶粉或5% BSA封閉1小時(shí)(室溫)或過(guò)夜(4度)。
5、-抗孵育,根據(jù)抗體說(shuō)明書選擇孵育時(shí)間,常規(guī)的孵育條件是室溫1小時(shí)或4度過(guò)夜,一 抗孵育后取出膜TBST洗滌3次,每次5分鐘。
6、二抗孵育:根據(jù)-抗選擇合適的二抗(抗鼠、抗人抗兔等), 室溫孵育1小時(shí)后取出膜TBST洗滌3次,每次5分鐘。
7、顯影:將A、B底物按比例稀釋混合均勻后滴在膜上,暗室中將膠片置于膜上,蓋上壓片夾,曝光一定時(shí)間后將膠片放入顯影液中進(jìn)行顯影,直到出現(xiàn)清晰的蛋白質(zhì)條帶,清水漂洗一下后在定影液中定影, 曝光時(shí)間需綜合考慮蛋白質(zhì)的.上樣量,抗體稀釋濃度,抗體孵育時(shí)間等因素。
8、定影后,清洗膠片,晾干,標(biāo)定marker,掃描圖片和2D Western blot圖片分析。
從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包及論文潤(rùn)色服務(wù),協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色十多年,是您值得信賴的科研合作伙伴!
如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無(wú)法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。
實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):
實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目
| |||
細(xì)胞熒光染料標(biāo)記檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
| |||
| |||
染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實(shí)驗(yàn)服務(wù)
| |||
| |||
|