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AZ00003 All-in-One RT SuperMix for qPCR試劑
- 公司名稱 上海徠儀生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào) AZ00003
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2024/9/18 15:23:21
- 訪問(wèn)次數(shù) 332
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| 供貨周期 | 兩周 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,食品,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
|---|
儲(chǔ)運(yùn)條件
-20℃
產(chǎn)品組成
All-in-One RT SuperMix for qPCR試劑
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
All-in-One RT SuperMix for qPCR(with dsDNase) 是一款高效、便捷、減少污染的高質(zhì)量一鏈cDNA 合成試劑盒，包含M-MLV GIIIReverse Transcriptase 及其反應(yīng)Buffer、RNA 酶抑制劑、dNTPs,Oligo(dT)20VN 和隨機(jī)引物等一鏈cDNA 合成所需的所有組分，僅需加入RNA 模板和水即可開(kāi)始反應(yīng)。All-in-One RT SuperMix for qPCR(withdsDNase) 作為升級(jí)后的一鏈cDNA 合成試劑盒，15 分鐘內(nèi)最長(zhǎng)可獲得12 kb cDNA，產(chǎn)物可用于qPCR、普通PCR 等實(shí)驗(yàn)。從組織或細(xì)胞中提取的RNA 往往殘留基因組DNA 污染，如果反轉(zhuǎn)錄前不做去除處理，下游進(jìn)行qPCR 反應(yīng)時(shí)基因組DNA 與cDNA會(huì)同時(shí)進(jìn)行擴(kuò)增，尤其是引物設(shè)計(jì)在同一外顯子上時(shí)，影響定量準(zhǔn)確性。本試劑盒所采用的dsDNase 能夠特異性消化雙鏈DNA 或DNARNA雜合雙鏈中的DNA，并且具有熱敏感性，在逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)溫度下即可快速不可逆地失活。與傳統(tǒng)使DNase I 去除基因組DNA 污染的方法相比，dsDNase 無(wú)需額外加入EDTA 進(jìn)行失活，不僅節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間，而且降低了對(duì)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的抑制。可依據(jù)基因組DNA 污染嚴(yán)重程度，選擇去基因組DNA 污染與反轉(zhuǎn)錄分開(kāi)進(jìn)行，或者去基因組DNA 污染與反轉(zhuǎn)錄一步進(jìn)行的操作方法。
使用方法
針對(duì)基因組DNA 含量低的RNA 樣品（推薦方案）
All-in-One RT SuperMix for qPCR試劑
① 于冰上配制如下反應(yīng)體系：
a. 推薦使用試劑盒提取的高質(zhì)量RNA 作為模板。
② 輕柔吸打混勻，瞬離；
③ 37℃溫育2 min，以去除基因組DNA 污染；
④ 55℃溫育15 min；
⑤ 反應(yīng)結(jié)束后，85℃溫育2 min 以終止反應(yīng)；
⑥ 迅速將獲得的cDNA 置于冰上，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；或立即保存于-20℃。
針對(duì)基因組DNA 含量高RNA 樣品
1. 基因組DNA 污染去除
① 于冰上配制如下反應(yīng)體系：
a. 推薦采用試劑盒提取的RNA 作為模板。
② 輕柔吸打混勻，瞬離；
③ 37℃溫育2 min，以去除基因組DNA 污染；
注：若RNA 中基因組DNA 污染嚴(yán)重，可適當(dāng)延長(zhǎng)37℃溫育時(shí)間至5 min。
④ 65℃溫育2 min，使dsDNase 失活，然后置于冰上。
2. 第一鏈cDNA 合成
① 于冰上配制如下反應(yīng)體系：
② 輕柔吸打混勻，瞬離；
③ 50℃溫育15 min；
注：若目標(biāo)RNA 不含Poly(A) 結(jié)構(gòu)，可預(yù)先25℃溫育10 min。
④ 反應(yīng)結(jié)束后，85℃溫育2 min，以終止反應(yīng)；
⑤ 將獲得的cDNA 溶液置于冰上，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
注：cDNA 溶液置于-20℃儲(chǔ)存，建議不超過(guò)1 周；置于-80℃可長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
注意事項(xiàng)
預(yù)混液中已經(jīng)包含Oligo(dT)20VN 和隨機(jī)引物，不僅適用于包含Poly(A) 結(jié)構(gòu)的真核生物mRNA，也適用于不含Poly(A) 結(jié)構(gòu)的原核生物RNA、真核生物rRNA 和tRNA 等模板，但不適用于miRNA 等小RNA 模板。
美國(guó)Azaood公司成立于2004年，是一家開(kāi)發(fā)和生產(chǎn)用于生命科學(xué)研究、診斷和生物技術(shù)應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶、蛋白質(zhì)、核酸和細(xì)胞分離試劑盒、胎牛血清的；Azood公司是通過(guò)了ISO9001認(rèn)證的主要制造商，可以滿足從研究到大規(guī)模批量生物加工和OEM應(yīng)用與要求的公司。
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