兔骨髓間充質干細胞采用沖洗骨髓、密度梯度離心、差速貼壁法結合培養基篩選制備而來，兔骨髓間充質干細胞（BMSC）分離自骨髓；骨髓是機體的造血組織，位于身體的許多骨骼內。成年動物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細胞、血小板和各種白細胞。血小板有止血作用，白細胞能殺滅與抑制各種病原體，包括細菌、病毒等；某些淋巴細胞能制造抗體。因此，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨質間的網眼中，是一種海綿狀的組織，能產生血細胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓。出生時，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大，脂肪細胞增多，相當部分紅骨髓被黃骨髓取代，最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓基質系統內存在的骨髓間充質干細胞是一種除造血干細胞以外的、具有高度自我更新能力和多向分化潛能的干細胞，可以向骨、軟骨、肌組織、皮膚、脂肪、神經等多種組織分化，因此可以作為組織工程中的種子細胞。在骨髓中，BMSC占骨髓有核細胞總數的0.001%-0.1%，含量極低。骨髓間充質干細胞的體外培養條件要求較高，在培養過程中，受貼壁時間、種植密度、血清含量、培養溫度和培養基pH值等條件的影響。骨髓間充質干細胞是骨髓基質干細胞，對骨髓中的造血干細胞（HSC）不僅有機械支持作用，還能分泌多種生長因子（如IL-6，IL-11，LIF，M-CSF及SCF等）來支持造血。骨髓間充質干細胞(bone mesenchymal stem cells，BMSCs)具有多向分化潛能，能促進間充質組織的再生，如：骨、軟骨、肌肉、韌帶、肌腱、脂肪及基質等組織。在骨髓中，BMSCs占骨髓有核細胞總數的0.001%~0.1%，含量極低。而同時，由于組織工程需要大量的種子細胞，從嚙齒類動物骨髓分離BMSCs的技術上的難度限制了許多實驗的開展。體外分離培養純度高、活力強、生物特性均一的BMSCs對組織工程及細胞的體內、體外實驗顯得至關重要。

1.吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養基終止消化；

3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；

4.待細胞貼壁后，培養觀察；之后每2-3天換液一次新鮮的培養基。

備注：由于實驗所用試劑、操作環境及操作手法的不同，以上方法僅供各實驗室參考

客戶在細胞培養過程中，有任何技術問題可以技術服務電話： 按 2，我們隨時給予解答。

1.培養基于4℃條件下可保存3-6個月。

2.在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。

3.傳代培養過程中，消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。

4.運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的培養基來培養細胞。