成像模式 

相對于普通的Epifluorescence(EPI)/模式，Nanoimager有total internal reflection fluorescence (TIRF)/ highly inclined and laminated optical sheet (HILO)兩種模式可自由切換。

EPI：激發較厚的樣品（＞10um），信號噪聲強，即傳統模式。

TRIF：激發薄層樣品（＜200nm），信號噪聲弱，適用于膜表面成像。

HILO：激發樣品厚度（＜10um），信號噪聲較弱，適用于大部分成像。 

應用領域

應用案例

1、單分子FRET 

    Nanoimager是目前*臺用于大視野單分子熒光共振能量轉移(smFRET)的商業化儀器。 FRET是一種兩個熒光分子間非輻射性的能量轉移方式，反映兩者的分子間距。 FRET一般在2 – 10 nm的間距發生。 smFRET研究中，作為供體的熒光分子由激光激發，將能量轉移至臨近的受體熒光分子。被激發的受體將能量以熒光形式發散。供體與受體可以連接至同一個或者不同的分子。 

    smFRET可以用于測量核酸或者單個蛋白分子的分子內距離，也可以用于研究蛋白亞基間的相互作用；還可應用于研究藥物對于酶結合位點的構象動力學的作用，或是神經退行性疾病中蛋白的聚集。 smFRET可以用于在單分子層面推到結合常數、反應途徑與停滯時間而不受總體平均值干擾。 

     Nanoimager適用于smFRET的關鍵功能包括：同時雙色成像；單分子散射光強度和總體平均的實時分析；視野中數千個單分子的高通量成像，以及用交替熒光激發 (ALEX) smFRET的功能來定量化學計量與FRET效率。圖4是smFRET用于研究單個DNA霍利迪交叉的動力學。 

 用smFRET檢測霍利迪交叉(HJs)的實時構象變化

 2、單分子示蹤

    Nanoimager可以在兩個通道同時示蹤細胞或者純化物樣品中的單分子 (圖5)，并計算擴散系數。細胞中分子的擴散系數可以被示蹤，如酶或蛋白可以通過藥物和抗生素的反應來示蹤。低擴散率可以表示標記分子與另一分子或結構的相互作用或相結合。同時示蹤兩種標記了不同熒光分子的分子可以確定兩者動態相互作用的水平。 

    Nanoimager可以直接反映純化樣品中熒光粒子的擴散率和預估大小，具有敏感性 (單熒光分子級別) 和特異性 (雙色標記可以顯著降低檢測雜質的可能性)。 

Nanoimager雙色追蹤單分子/粒子

3、使用Nanoimager成像—更大的視野

    Nanoimager的每個成像通道均有50 µm x 80 µm的大視野，而其他大部分單分子顯微設備只有20µm x 20 µm的視野。視野中照明均勻，可以實現單分子或細胞的高通量成像并快速收集數據。
    下圖顯示了以10倍于其他技術的速度對突變的大腸桿菌細胞的不同表型進行成像。為了獲得不同表型的可靠的結果，需要對大量細胞進行比較。使用具有大視野，能夠自動對焦和自動獲取數據的Nanoimager可以顯著加快整個實驗速度和通量。將大視野與超分辨成像結合是Nanoimager的*優勢。 

Nanoimager的大視野可以在高分辨率下實現高通量成像

規格及參數：

1、數據獲取分析：

分 辨 率   橫向分辨率<20nm；縱向分辨率<50nm 

成像總數   可配置4激光 

視 野    每個通道50μm×80μm 

獲取速度   100fps/幀  

3D成 像    像散成像

  成像速度    數秒～數分鐘

2、操作參數：

聚焦模式   單次自動對焦/連續自動聚焦

穩 定 性   <1 μm/K的漂移；<1 nm (1 Hz to 500 Hz)振幅 

照射模式    TRIF /HILO 

溫度控制    自動補償 
環境監控    陣列傳感器

3、硬件參數：

規    格  21 cm x 21 cm x 15 cm 

相    機  新sCMOS 

物    鏡  油鏡 NA=1.4～1.49

激 光 器    DPSS 和二極管

激光類型  紫色: 405 nm (150 mW) 

藍色: 473 nm (300 or 1000 mW), 488 nm (200 mW) 

綠色: 532 nm (300 or 1000 mW), 561 nm (200 or 300mW) 

紅色: 640 nm (300 or 1000 mW) 近紅外: 730 nm (300 or 1000 mW)

樣 品 臺   20/20/10 mm XYZ移動范圍，1 nm精度的閉合壓電平臺 

工 作 站  內存＞32GB，顯卡GeForce GTX 1080/m