BODIPY™ 581/591 C11（脂質過氧化傳感器）
- 公司名稱 賽默飛世爾科技（中國）有限公司
- 品牌 Invitrogen
- 型號
- 產地
- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2024/12/5 12:33:01
- 訪問次數 80
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欲了解更多信息，請瀏覽公司網站：www.thermofisher.com 賽默飛世爾科技中國簡介賽默飛世爾科技進入中國發展已超過35年，在中國的總部設于上海，并在北京、廣州、香港、成都、沈陽、西安、南京、武漢、昆明等地設立了分公司，員工人數約為5000名。我們的產品主要包括分析儀器、實驗室設備、試劑、耗材和軟件等，提供實驗室綜合解決方案，為各行各業的客戶服務。為了滿足中國市場的需求，現有7家工廠分別在上海、北京、蘇州和廣州等地運營。我們在全國還設立了8個應用開發中心以及示范實驗室，將世界級的前沿技術和產品帶給中國客戶，并提供應用開發與培訓等多項服務；擁位于上海的中國創新中心，擁有有100多位專業研究人員和工程師及70多項專利。創新中心專注于針對垂直市場的產品研究和開發，結合中國市場的需求和國外先進技術，研發適合中國的技術和產品；我們擁有遍布全國的維修服務網點和特別成立的中國技術培訓團隊，在全國有超過2600名專業人員直接為客戶提供服務。我們致力于幫助客戶使世界更健康、更清潔、更安全。
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科學儀器
ODIPY™ 581/591 十一烷酸可用于檢測細胞和細胞膜中的活性氧 (ROS)。 染料的多不飽和丁二烯基部分的氧化導致熒光發射峰從～590 nm移動到～510 nm。 在還原狀態下，BODIPY™ 581/591 十一烷酸的激發和發射值為 581/591 nm； 氧化后，激發和發射值移至 488/510 nm。
該產品我們建議用高質量無水 DMSO 溶解，母液濃度 1 至 10 mM，≤?20°C 避光保存。
BODIPY™ 581/591 C11 檢測脂質過氧化的原理
BODIPY™ 581/591 C11的分子結構如圖2所示，染料的多不飽和丁二烯基部分（紅色虛線框）可與ROS發生反應，導致染料的熒光發射峰從～590 nm移動到～510 nm。 在還原狀態下，BODIPY™ 581/591 C11的激發和發射值為 581/591 nm，呈現紅色熒光； 經氧化后，激發和發射值移至 488/510 nm，呈現出綠色熒光。
圖2. BODIPY™ 581/591 C11 檢測脂質過氧化的原理2
BODIPY™ 581/591 C11染料使用方法
染料溶解與保存：
BODIPY™ 581/591 C11的分子量為504.4 g/mol。1 mg染料可以使用198 µl 高質量無水DMSO溶解成10 mM母液，溶解好的母液于-20 ℃分裝避光保存，避免反復凍融。
染色流程：
染料的推薦工作液濃度為1-10 µM，可以使用培養基進行稀釋，孵育時間建議為30分鐘，的工作濃度和孵育時間需要根據實驗體系進行調整。具體染色流程請參考圖3。
圖3. BODIPY™ 581/591 C11染料使用流程
BODIPY™ 581/591 C11結果分析
BODIPY™ 581/591 C11適用于多種分析方法（流式細胞儀、熒光顯微鏡、高內涵），比較常用的是流式細胞儀和熒光顯微鏡。下面，我們分別以這兩種檢測平臺為例，介紹一下結果分析方法。根據染料的光譜性質，我們可以使用以下通道來進行檢測：
*在使用流式細胞儀檢測還原態時，需要使用561nm激光器激發的PE通道來檢測。對于PE通道使用488nm激光器激發的流式細胞儀，建議只檢測FITC通道的信號（如同時檢測FITC和PE通道，兩個通道之間存在干擾，導致結果不準確），這也是大多數文獻中所使用的方法。
流式細胞儀檢測結果
典型的流式數據如圖4所示,僅使用FITC通道檢測氧化態，使用直方圖對數據進行分析。與對照組對比，經誘導脂質過氧化后，染料氧化態增加，FITC通道熒光強度增強，信號峰右移（圖4A），也可以對氧化態平均熒光強度進行統計比較（圖4B）。
圖4. BODIPY™ 581/591 C11檢測脂質過氧化流式結果分析
Hypoxia–reoxygenation (HR)誘導脂質過氧化，RLX處理抑制脂質過氧化的產生。3
熒光顯微鏡檢測結果
典型的熒光顯微鏡成像結果如圖5所示，分別使用FITC和Texas Red通道來檢測染料的氧化態和還原態。經誘導產生脂質過氧化后，綠色信號增強（圖5A）。在統計時，使用氧化態與還原態熒光強度的比值來對不同的實驗組進行比較（圖5B）。氧化態/還原態比值越高，說明脂質過氧化程度越高。
圖5. BODIPY™ 581/591 C11檢測脂質過氧化成像結果分析4
脂質過氧化染料常見問題解析
問：BODIPY™ 581/591 C11熒光探針可以兼容固定嗎？
答：BODIPY™ 581/591 C11熒光探針適用于活細胞檢測，不兼容固定。此外，該染料也不能用于固定后的樣品。
問：樣品中含有GFP熒光蛋白，還可以使用BODIPY™ 581/591 C11熒光探針嗎？如不能，有其他產品推薦嗎？
答：由于BODIPY™ 581/591 C11熒光探針在氧化態時呈現綠色，與細胞中的GFP沖突，因此不建議在含有GFP的樣品中使用此探針檢測脂質過氧化。向您推薦B3932，其可以兼容GFP，在還原態時，激發和發射光波長分別為665/676 nm，被氧化后激發和發射光波長會變成580/605 nm。
參考文獻
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3. Nistri, S., Fiorillo, C., Becatti, M., & Bani, D. (2020). Human relaxin-2 (serelaxin) attenuates oxidative stress in cardiac muscle cells exposed in vitro to hypoxia–reoxygenation. evidence for the involvement of reduced glutathione up-regulation. Antioxidants, 9(9), 774.
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