Green Retrobeads™ IX 試劑

原裝可靠的熒光示蹤劑，不要被其他供應商未經證實的說法所誤導！對于可靠，穩健的逆行運輸，只有一個選擇：來自Lumafluor的RetroBeads™。

無論他們如何稱呼他們的產品，只有來自Lumafluor的Retrobeads™（普通和IX）已被數百篇已發表的論文證明是有效的，

范圍從無脊椎動物到靈長類動物，以及介于兩者之間的所有系統。

Lumafluor Retrobeads™:

高度受限注射——非常適合詳細的連接性研究。在活細胞中無限期存在（10 ~ 10年?。?，無毒。

與大多數其他順行示蹤劑、原位雜交和免疫組織化學相容。

將生物活性藥物（如神經營養因子和神經遞質激動劑/拮抗劑）遞送到局部區域；逆行轉運可以確定哪些神經元暴露于藥物[Riddle等人]。

是專門為促進蛋白質和其他生物活性化合物的吸附而制備的。

靈長類動物系統中的示蹤劑是否比標準系統更有效

經過驗證的結果

來自Lumafluor的RetroBeads™是用于逆行追蹤的原始微球，也是在您的實驗中被證明有效的微球。

綠色和紅色熒光RetroBeads™由Lumafluor提供，使用熒光乳膠微球或“珠子”作為逆行神經元示蹤劑的大多數程序。

Green Retrobeads™ IX 試劑

供應方式：所附小瓶中含有懸浮在蒸餾水中的微珠濃縮溶液。如果紅珠用于神經元通路的逆行追蹤，溶液可以原樣使用，也可以稀釋。

在大鼠視覺皮層中，當使用紅珠時，1:4的稀釋度似乎不會降低逆行標記的質量或程度。

但是，對于初始實驗，我們強烈建議使用全強度溶液。除蒸餾水外，標準鹽溶液（NaCl, KCl）也可用作稀釋劑。

所提供的綠色珠子為逆行示蹤實驗做好了準備。不建議稀釋綠色珠子。

儲存：頭溶液應儲存在加濕的容器中，在冰箱中，以防止蒸發。不要凍僵！被凍住的珠子不會起作用，也無法獲救。

如果珠子變干了，它們就不能再合成了。這種材料沒有保質期，但是，如果儲存得當，它可以保存好幾年。

應用：珠子最好使用壓力注射（例如1毫升漢密爾頓注射器，或加壓空氣注射系統）。

對于局部電路工作，通過直徑為30-50微米的玻璃移液管注入非常小的體積（30-50毫升）。

對于常規逆行示蹤，使用更大的體積（0.1-0.3 ul）和更大直徑的移液頭。

然而，即使注射量大，珠粒也不會擴散到遠離注射部位（通常小于1mm）。

因此，為了標記所有或大部分投射到一個大結構的神經元，需要進行多次注射。

不建議使用離子電泳珠作為遞送示蹤劑的有效手段。然而，這些珠子確實帶一個凈負電荷。

存活時間：在大多數溫血脊椎動物系統中，注射后的最小有效存活時間約為24小時。標記強度隨著生存時間的延長而增加，可達48小時。

48小時后，沒有觀察到標記強度的增加（或減少）。這些值在冷血動物中可能有很大的不同，建議初始存活時間為一周。

最長生存時間尚未確定，但即使在14個月的生存時間后，標簽的質量或范圍仍未改變。細胞可能被標記。沒有觀察到對動物或神經元的毒性作用。

固定和處理：標準固定是0.1 M磷酸鹽緩沖液洗滌，然后在0.1 M磷酸鹽緩沖液（pH 7.4）中加入4%多聚甲醛。

戊二醛會產生大量的組織自身熒光，這可能會模糊頭部標記的神經元，如果可能的話應該避免。綠珠在戊二醛固定材料中不可見。

冷凍切片收集在磷酸鹽緩沖液中，安裝在涂有明膠的載玻片上，風干。干燥后，載玻片可在二甲苯中清除1分鐘，并蓋上Fluoromount或Krystalon。

Fluoromount可從紐約州Farmingdale的Atomergic chemicals Corp.獲得；來自新澤西州吉布斯敦Harleco （EM Industries）的Krystalon。

短暫接觸酒精和二甲苯是無害的，但長時間接觸（超過5分鐘）會破壞珠子。珠子對甘油非常敏感，如果安裝在含甘油的溶液中，會迅速褪色。

在需要使用性清除/安裝劑的情況下，水楊酸甲酯優于甘油。如果在黑暗中保存載玻片，細胞中的標記至少在一年內不會褪色

（盡管背景自身熒光可能會顯著增加）。到目前為止，在塑料植入后保留頭部標簽的嘗試還沒有成功。

觀察：紅色珠子中的染料是羅丹明，因此任何羅丹明的熒光濾光片都可以使用。一些舊的尼康羅丹明濾鏡組提供非常高的背景，

這可以使標記的細胞不可見。蔡司和雷茲標準羅丹明濾光片均取得了良好的效果。對于綠色珠子，寬帶熒光素過濾器效果很好。

為路西法黃色設置的過濾器會產生更強烈的信號，但代價是更高的背景。窄帶熒光素濾光片比寬帶濾光片發出的信號要弱得多。

即使經過長時間的觀察或顯微攝影，珠子也不會明顯褪色。

在低倍率、低數值孔徑干物鏡（如X4、X10）下，通?？床坏綐撕?。如果細胞被強烈標記，X10的浸沒物鏡（數值孔徑為0.4或更大），

或更高倍率的干物鏡，通常會顯示細胞。然而，X25浸入式物鏡經常會顯示出低倍率物鏡看不到的非常清晰的標記細胞。

這些警告對于綠色珠子尤其適用。在確定實驗無效之前，用浸泡物鏡檢查注射部位附近的切片。可見大量的局部標記細胞。

對于綠色珠子使用者的額外信息：在目前所做的工作中，似乎年輕的動物比年長的動物更容易運輸標簽。此外，年輕動物的組織自身熒光較低。

因此，如果可能的話，在涉及綠珠的實驗中，建議使用年輕的動物。

因為綠色珠子比紅色珠子在更短的波長下被激發，組織自身熒光是一個更大的問題。因此，努力減少自身熒光將產生更好的對比信號。

減少自身熒光的方法包括：

1)使用更薄的切片（例如30微米而不是40或50微米）；2)使用更年輕的動物，3)在封面滑落后立即檢查部分（背景隨著時間的推移而增加）。