IKCA1 (KCNN4) HEK293 細胞系
- 公司名稱 武漢艾美捷科技有限公司
- 品牌 BPS Bioscience
- 型號
- 產地
- 廠商性質 代理商
- 更新時間 2024/12/26 11:52:59
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供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 化工,生物產業 |
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IKCA1(KCNN4)HEK293細胞系是表達人類IKCA1的工程化HEK293細胞,也稱為KCNN4(中等電導鈣激活鉀通道蛋白4),IK1,hKCa4和hSK4,Genbank登錄號NM_002250。該細胞系已通過使用膜電位敏感熒光染料(DiBAC4(3))的細胞實驗和西方印跡法對IKCA1表達進行驗證。
背景
IKCA1,也稱為中等電導鈣激活鉀通道蛋白4,IK1,hKCa4和hSK4,是可能的異源四聚體電壓獨立鉀通道的一部分,該通道由細胞內鈣激活。激活后會跟隨膜超極化,促進鈣內流。編碼的蛋白可能是T淋巴細胞中主要的鈣激活鉀通道的一部分,但它也存在于內皮細胞和心臟成纖維細胞中。它們有助于血管平滑肌細胞增殖、遷移和心臟纖維化。在乳腺癌(BC)細胞中發現IKCA1高水平存在,耗竭后導致腫瘤形成減少。IKCA1可以被小分子調節,這些可能在BC和心血管疾病治療中提供z療機會。
作為BPS Bioscience在中國的區域總代理,艾美捷科技強烈推薦BPS Bioscience熱銷產品IKCA1 (KCNN4) HEK293 細胞系。產品僅用于科研,不可用于臨床診斷。
產品名稱 | 貨號 | 詳情 |
IKCA1 (KCNN4) HEK293 細胞系 | BPS-90330 | 查看 |
應用
在研究和藥物發現過程中篩選和驗證IKCA1的激動劑和拮抗劑。
細胞解凍
1. 從液氮儲存中取出一個細胞小瓶。在準備好解凍之前,保持在干冰上。
2. 準備好解凍時,在37°C水浴中搖晃裝有冷凍細胞的小瓶大約60秒。細胞解凍后(可能比60秒稍快或稍慢),迅速將小瓶的全部內容轉移到一個空的50毫升錐形管中。
注意:在37°C水浴中放置細胞過久將導致活性迅速喪失。
3. 使用10毫升的血清學移液管,慢慢向含有細胞的錐形管中加入10毫升預熱的解凍培養基1。解凍培養基1應滴加同時輕輕搖晃錐形管,以實現溫和混合并避免滲透沖擊。
4. 立即以300 x g的速度離心細胞5分鐘,去除培養基并將細胞在5毫升預熱的解凍培養基1中重懸。
5. 將重懸的細胞轉移到T25或T75培養瓶中,并在37°C、5% CO2培養箱中培養。
6. 培養24小時后,檢查細胞附著和活性。更換培養基為新鮮的解凍培養基1,并繼續在37°C、5% CO2培養箱中培養,直到細胞準備好分裂。
7. 細胞應在w全融合前傳代。在s次傳代及后續傳代中,使用生長培養基1B。
細胞傳代
1. 抽去培養基,用無Ca2+/Mg2+的磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗細胞,并用0.05% y酶/EDTA從培養容器中分離細胞。
2. 一旦細胞分離,加入生長培養基1B并轉移到試管中。
3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘,去除培養基并將細胞在生長培養基1B中重懸。
4. 按照推薦的亞培養比例1:10至1:20,每周一次或兩次將細胞種入新的培養容器中。
細胞冷凍
1. 抽去培養基,用無Ca2+/Mg2+的PBS沖洗細胞,并用0.05% y酶/EDTA從培養容器中分離細胞。
2. 一旦細胞分離,加入生長培養基1B并計數細胞。
3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘,去除培養基并將細胞在4°C冷凍培養基(BPS Bioscience #79796)中重懸,細胞濃度約為2 x 10^6個細胞/ml。
4. 將1 ml的細胞懸浮液分裝到每個冷凍小瓶中。將小瓶放入保溫容器中緩慢冷卻,并在-80°C下保存過夜。
5. 次日將小瓶轉移到液氮中長期保存。
注意:建議在早期傳代時擴增細胞并至少冷凍10個小瓶以備將來使用。
圖1. 離子霉素誘導的細胞內鈣水平增加激活在IKCA1(KCNN4)HEK293細胞系中表達的IKCA1通道。
IKCA1(KCNN4)HEK293細胞和野生型HEK93細胞與DiBAC4(3)預孵化,然后用離子霉素(1 μM)處理。通過測量細胞熒光(λ激發485±10nm,λ發射528±10nm)監測通道激活。結果表明,用離子霉素處理的IKCA1-HEK293細胞由于通道激活引起的超極化而表現出熒光減少。值表示為添加離子霉素后/添加離子霉素前的細胞熒光。
文獻參考:
Ghanshani S., et al., J Biol Chem. 275(47): 37137-37149.
Hoffman J.F., et al., 2003 PNAS 100 (12): 7366-7371.
de-Allie F.A., et al., 1996, Br J Pharmacol. 117(3):479-487.
Terstappen G.C., et al., 2003 Neurosci Lett. 346(1-2):85-88.
Gross D., et al., 2022 Cell Death and Disease 13:902.
BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認證的生命科學領域的供應商,公司一直致力于開發藥物研發領域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創立,從創立至今一直致力于提供藥物研發領域的創新解決方案,以推動新的藥物發現。公司主要關注的領域包括免疫療法、表觀遺傳學、CRISPR、細胞信號轉導等,主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。
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