IL-6響應型熒光素酶報告基因HEK293細胞系
- 公司名稱 武漢艾美捷科技有限公司
- 品牌 BPS Bioscience
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- 廠商性質 代理商
- 更新時間 2024/12/26 13:30:20
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供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 化工,生物產業 |
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IL-6響應型熒光素酶報告基因HEK293細胞系是一種設計用于監測IL-6(白細胞介素6)/IL-6受體相互作用的HEK293細胞系。這些細胞表達內源性IL-6受體(IL-6R和gp130),并被工程化以在STAT響應元件的控制下表達螢火蟲熒光素酶(圖1)。
該細胞系已驗證對人類白細胞介素-6(IL-6)、IL-27有反應,進一步的功能驗證實驗表明,IL-6誘導的熒光素酶活性可被JAK抑制劑CP 690,550和抗IL-6R中和抗體降低。
背景
IL-6(白細胞介素-6)在炎癥發生時迅速產生,通過刺激急性期反應、造血和免疫反應,在宿主防御中發揮關鍵作用。IL-6通過作用于STAT3(信號轉導及轉錄激活因子3)信號通路,對T細胞和B細胞產生刺激效應。
IL-6表達失調對慢性炎癥、自身免疫和癌癥具有b理效應。Il-6的表達在多個層面上受到調節,轉錄由多種刺激因素誘導,如TLR(Toll樣受體)配體、TNFα(腫瘤壞死因子α)和ROS(活性氧)。IL-6還涉及細胞衰老,并能觸發衰老引起的炎癥和與年齡相關的疾病。使用抗IL-6R抗體托珠單抗在治療RA(類風濕性關節炎)和Castleman病中取得了積極成果。因此,開發能夠靶向IL-6和IL-6信號通路的分子是一個活躍的研究領域,可以作為預防和治療慢性炎癥性疾病和癌癥的有效策略。
圖1:IL-6響應型熒光素酶報告基因HEK293細胞系背后報告基因表達機制的示意圖。
作為BPS Bioscience在中國的區域總代理,艾美捷科技強烈推薦BPS Bioscience熱銷產品IL-6 響應型熒光素酶報告基因 HEK293 細胞系。產品僅用于科研,不可用于臨床診斷。
產品名稱 | 貨號 | 詳情 |
IL-6 響應型熒光素酶報告基因 HEK293 細胞系 | BPS-82235 | 查看 |
應用
? 監測IL-6活性。
? 研究化合物對IL-6/IL-6R介導的信號通路的影響。
? 篩選抗IL-6或抗IL-6R抗體。
細胞培養協議
注意:HEK293細胞源自人類材料,因此建議采取適當的安全預防措施。
細胞解凍
1. 在37°C水浴中搖晃裝有冷凍細胞的小瓶大約60秒。細胞解凍后(可能比60秒稍快或稍慢),迅速將小瓶的全部內容轉移到含有10 ml預熱的解凍培養基1的試管中。在37°C水浴中放置細胞過久將導致活性迅速喪失。
2. 立即以300 x g的速度離心細胞5分鐘,去除培養基并將細胞在5 ml預熱的解凍培養基1中重懸。
3. 將重懸的細胞轉移到T25或T75培養瓶中,并在37°C、5% CO2培養箱中培養。
4. 培養24小時后,檢查細胞附著和活性。更換培養基為新鮮的解凍培養基1,并繼續在37°C、5% CO2培養箱中培養,直到細胞準備好傳代。
5. 細胞應在w全融合前傳代。在s次傳代及后續傳代中,使用生長培養基1N。
細胞傳代
1. 抽去培養基,用無Ca2+/Mg2+的磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗細胞,并用0.05% y酶/EDTA從培養容器中分離細胞。
2. 一旦細胞分離,加入生長培養基1N并轉移到試管中。
3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘,去除培養基并將細胞在生長培養基1N中重懸。
4. 按照推薦的亞培養比例1:5至1:10,每周一次或兩次將細胞種入新的培養容器中。
細胞冷凍
1. 抽去培養基,用無Ca2+/Mg2+的PBS沖洗細胞,并用0.05% y酶/EDTA從培養容器中分離細胞。
2. 一旦細胞分離,加入生長培養基1N并計數細胞。
3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘,去除培養基并將細胞在4°C冷凍培養基(BPS Bioscience #79796)中重懸,細胞濃度約為1 x 10^6個細胞/ml。
4. 將1 ml的細胞懸浮液分裝到每個冷凍小瓶中。將小瓶放入保溫容器中緩慢冷卻,并在-80°C下保存過夜。
5. 次日將小瓶轉移到液氮中長期保存。
注意:建議在早期傳代時擴增細胞并至少冷凍10個小瓶以備將來使用。
圖:IL-6響應型熒光素酶報告基因HEK293細胞系對人類IL-27的劑量反應曲線。
IL-6響應型熒光素酶報告基因HEK293細胞與不同濃度的人類IL-27共培養過夜,并使用One-Step?熒光素酶檢測系統測量熒光素酶活性。結果以熒光素酶報告基因表達的誘導倍數顯示(與未刺激的細胞相比)。
文獻參考:
Tanaka T., et al., 2014, Cold Spring Harb Perspect Biol. 6(10):a016295.
Choy EH., et al., 2020, Nature Rev Rheumatol. 16:335-345.
Hirano T., 2021 International Immunology 33(3):127-148.
BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認證的生命科學領域的供應商,公司一直致力于開發藥物研發領域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創立,從創立至今一直致力于提供藥物研發領域的創新解決方案,以推動新的藥物發現。公司主要關注的領域包括免疫療法、表觀遺傳學、CRISPR、細胞信號轉導等,主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。
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IL-6響應型熒光素酶報告基因HEK293細胞系IL-6響應型熒光素酶報告基因HEK293細胞系