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IL-6響應型熒光素酶報告基因HEK293細胞系

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武漢艾美捷科技有限公司(AmyJet Scientific Inc),簡稱艾美捷科技(AmyJet Scientific)。2010年底成立于九省通衢的湖北省武漢市,歷經五年多的發展,已成為國內的集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發為一體的專業化高科技生物企業。艾美捷科技總部設在武漢市洪山區光谷大道35號光谷總部二期時代1號樓13層,業務覆蓋全國。


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艾美捷科技與國內外優秀的生物試劑供應商保持著密切的合作關系,目前已成為眾多的中國總代理或一級代理,主要包括:Merck Millipore、Origene、AAT Bioquest、ABGENT、 Cayman Chemical、Abnova 、Biovision、ProSpec、Hycult Biotech 、Equitech-Bio、Trevigen、Alomone Labs、Epigentek、Abbkine、ImmunoReagents 、Jackson、SouthernBiotech、US Biological 、VIVA Bioscience 、Caisson Labs等,可以在*時間為用戶提供Z前沿的專業資訊、完備的產品及物流服務。

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供貨周期 現貨 應用領域 化工,生物產業

IL-6響應型熒光素酶報告基因HEK293細胞系是一種設計用于監測IL-6(白細胞介素6)/IL-6受體相互作用的HEK293細胞系。這些細胞表達內源性IL-6受體(IL-6R和gp130),并被工程化以在STAT響應元件的控制下表達螢火蟲熒光素酶(圖1)。

該細胞系已驗證對人類白細胞介素-6(IL-6)、IL-27有反應,進一步的功能驗證實驗表明,IL-6誘導的熒光素酶活性可被JAK抑制劑CP 690,550和抗IL-6R中和抗體降低。


背景

IL-6(白細胞介素-6)在炎癥發生時迅速產生,通過刺激急性期反應、造血和免疫反應,在宿主防御中發揮關鍵作用。IL-6通過作用于STAT3(信號轉導及轉錄激活因子3)信號通路,對T細胞和B細胞產生刺激效應。

IL-6表達失調對慢性炎癥、自身免疫和癌癥具有b理效應。Il-6的表達在多個層面上受到調節,轉錄由多種刺激因素誘導,如TLR(Toll樣受體)配體、TNFα(腫瘤壞死因子α)和ROS(活性氧)。IL-6還涉及細胞衰老,并能觸發衰老引起的炎癥和與年齡相關的疾病。使用抗IL-6R抗體托珠單抗在治療RA(類風濕性關節炎)和Castleman病中取得了積極成果。因此,開發能夠靶向IL-6和IL-6信號通路的分子是一個活躍的研究領域,可以作為預防和治療慢性炎癥性疾病和癌癥的有效策略。

IL-6響應型熒光素酶報告基因HEK293細胞系

圖1:IL-6響應型熒光素酶報告基因HEK293細胞系背后報告基因表達機制的示意圖。


作為BPS Bioscience在中國的區域總代理,艾美捷科技強烈推薦BPS Bioscience熱銷產品IL-6 響應型熒光素酶報告基因 HEK293 細胞系產品僅用于科研,不可用于臨床診斷。

產品名稱貨號詳情

IL-6 響應型熒光素酶報告基因 HEK293 細胞系

BPS-82235查看


應用

? 監測IL-6活性。

? 研究化合物對IL-6/IL-6R介導的信號通路的影響。

? 篩選抗IL-6或抗IL-6R抗體。


細胞培養協議

注意:HEK293細胞源自人類材料,因此建議采取適當的安全預防措施。

細胞解凍

1. 在37°C水浴中搖晃裝有冷凍細胞的小瓶大約60秒。細胞解凍后(可能比60秒稍快或稍慢),迅速將小瓶的全部內容轉移到含有10 ml預熱的解凍培養基1的試管中。在37°C水浴中放置細胞過久將導致活性迅速喪失。

2. 立即以300 x g的速度離心細胞5分鐘,去除培養基并將細胞在5 ml預熱的解凍培養基1中重懸。

3. 將重懸的細胞轉移到T25或T75培養瓶中,并在37°C、5% CO2培養箱中培養。

4. 培養24小時后,檢查細胞附著和活性。更換培養基為新鮮的解凍培養基1,并繼續在37°C、5% CO2培養箱中培養,直到細胞準備好傳代。

5. 細胞應在w全融合前傳代。在s次傳代及后續傳代中,使用生長培養基1N。


細胞傳代

1. 抽去培養基,用無Ca2+/Mg2+的磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗細胞,并用0.05% y酶/EDTA從培養容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離,加入生長培養基1N并轉移到試管中。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘,去除培養基并將細胞在生長培養基1N中重懸。

4. 按照推薦的亞培養比例1:5至1:10,每周一次或兩次將細胞種入新的培養容器中。


細胞冷凍

1. 抽去培養基,用無Ca2+/Mg2+的PBS沖洗細胞,并用0.05% y酶/EDTA從培養容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離,加入生長培養基1N并計數細胞。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘,去除培養基并將細胞在4°C冷凍培養基(BPS Bioscience #79796)中重懸,細胞濃度約為1 x 10^6個細胞/ml。

4. 將1 ml的細胞懸浮液分裝到每個冷凍小瓶中。將小瓶放入保溫容器中緩慢冷卻,并在-80°C下保存過夜。

5. 次日將小瓶轉移到液氮中長期保存。

注意:建議在早期傳代時擴增細胞并至少冷凍10個小瓶以備將來使用。

IL-6響應型熒光素酶報告基因HEK293細胞系

圖:IL-6響應型熒光素酶報告基因HEK293細胞系對人類IL-27的劑量反應曲線。

IL-6響應型熒光素酶報告基因HEK293細胞與不同濃度的人類IL-27共培養過夜,并使用One-Step?熒光素酶檢測系統測量熒光素酶活性。結果以熒光素酶報告基因表達的誘導倍數顯示(與未刺激的細胞相比)。


文獻參考:

Tanaka T., et al., 2014, Cold Spring Harb Perspect Biol. 6(10):a016295.

Choy EH., et al., 2020, Nature Rev Rheumatol. 16:335-345.

Hirano T., 2021 International Immunology 33(3):127-148.


BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認證的生命科學領域的供應商,公司一直致力于開發藥物研發領域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創立,從創立至今一直致力于提供藥物研發領域的創新解決方案,以推動新的藥物發現。公司主要關注的領域包括免疫療法、表觀遺傳學、CRISPR、細胞信號轉導等,主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 


作為BPS Bioscience在中國的區域代理,艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BPS Bioscience以及客戶訂制化服務。


IL-6響應型熒光素酶報告基因HEK293細胞系

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