NFAT報告基因-HEK293細胞系
- 公司名稱 武漢艾美捷科技有限公司
- 品牌 BPS Bioscience
- 型號
- 產地
- 廠商性質 代理商
- 更新時間 2024/12/26 13:35:59
- 訪問次數 17
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武漢艾美捷科技有限公司（AmyJet Scientific Inc），簡稱艾美捷科技（AmyJet Scientific）。2010年底成立于九省通衢的湖北省武漢市，歷經五年多的發展，已成為國內的集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發為一體的專業化高科技生物企業。艾美捷科技總部設在武漢市洪山區光谷大道35號光谷總部二期時代1號樓13層，業務覆蓋全國。
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艾美捷科技與國內外優秀的生物試劑供應商保持著密切的合作關系，目前已成為眾多的中國總代理或一級代理，主要包括：Merck Millipore、Origene、AAT Bioquest、ABGENT、 Cayman Chemical、Abnova 、Biovision、ProSpec、Hycult Biotech 、Equitech-Bio、Trevigen、Alomone Labs、Epigentek、Abbkine、ImmunoReagents 、Jackson、SouthernBiotech、US Biological 、VIVA Bioscience 、Caisson Labs等，可以在*時間為用戶提供Z前沿的專業資訊、完備的產品及物流服務。
隨著公司業務的壯大，為了更好的服務客戶，公司組建了一支在生物領域經驗豐富的研發團隊-艾美捷生物技術中心，宣布進入自主研發階段，以期將更多更優質的產品*給國內生物領域的同仁。相信在不久的將來，將陸續有印有艾美捷Logo的產品與大家見面，并逐漸受到大家的認可！
專業的技術力量使我們能夠為廣大用戶提供強大的技術支持，深厚的人脈資源使我們在全國主要城市擁有眾多合作伙伴，艾美捷科技非常榮幸能將世界上*的生物產品*給國內從事生物學領域科研的老師和同仁，配備的優秀銷售隊伍以及專業的技術支持，隨時為客戶提供技術咨詢和售后服務。
作為專業性的產品供應公司，公司出資儲備了大量現貨；作為產品研發公司，公司必將不遺余力，努力向專業化、化標準邁進，打造科技與服務并存型企業！
誠摯邀請各位供應商、經銷商、老師們蒞臨艾美捷科技參觀、指導！
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| 供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 化工,生物產業 |
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蛋白激酶C (PKC)/鈣離子(Ca2+)響應途徑會導致激活T細胞激活因子的核因子（NFAT）。NFAT由Ca2+和鈣離子/鈣調蛋白依賴的絲A酸磷酸酶鈣調磷酸酶調控。在靜息細胞中，NFAT蛋白被磷酸化并位于細胞質中；受到刺激后，它們會被鈣調磷酸酶去磷酸化，轉移到細胞核，并誘導基因表達。
NFAT報告基因-HEK293細胞系包含一個在NFAT響應元件控制下的螢火蟲熒光素酶基因，該基因被穩定整合到HEK293細胞中。這個細胞系已經驗證了對佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯（PMA）和伊諾莫辛的刺激反應。
作為BPS Bioscience在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦BPS Bioscience熱銷產品NFAT 報告基因 - HEK293 細胞系 (PKC/Ca2+ 通路)。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。
| 產品名稱 | 貨號 | 詳情 |
NFAT 報告基因 - HEK293 細胞系 (PKC/Ca2+ 通路) | BPS-79298 | 查看 |
應用
? 監測細胞內鈣離子水平。
? 篩選PKC/Ca2+途徑的激活劑或抑制劑。
所需但未提供的材料
? PMA（LC Laboratories, #P1680）在DMSO中制備庫存溶液。
? 伊諾莫辛（Sigma, #I3909）在DMSO中制備庫存溶液。
? 檢測培養基：解凍培養基1（無遺傳霉素）
? 生長培養基1B（BPS Cat. #79531）
? 96孔組織培養板或96孔組織培養處理的白色透明底部檢測板
? RO-31-8220（EMD Millipore, #557520）或其他PKC抑制劑
? 用于測量螢火蟲熒光素酶活性的ONE-Step熒光素酶檢測試劑（BPS Bioscience, #60690）。
? 熒光素酶檢測儀
A. NFAT報告基因-HEK293細胞對TCR交聯劑的反應。
1. 在生長培養基1B中收獲NFAT報告基因-HEK293細胞，并將細胞以每孔約30,000個細胞的密度播種到含有45 ?l檢測培養基的白色透明底部96孔微孔板中。
2. 將板在37°C的CO2培養箱中培養過夜（約18-24小時）。
3. 將TCR交聯劑（PMA與伊諾莫辛）稀釋到檢測培養基中，達到所需最終濃度的10倍，并每孔加入5 ?l稀釋液。（我們建議從30 nM PMA和1 ?M伊諾莫辛的起始濃度開始。）最終DMSO濃度可高達0.5%。
向未刺激對照孔中加入相同濃度DMSO但不含交聯劑的5 ?l檢測培養基。
向無細胞對照孔中加入含DMSO的50 ?l檢測培養基（用于確定背景發光）。
每個處理至少設置三次重復。
4. 將細胞在37°C的CO2培養箱中培養過夜（約18小時）。
5. 第二天，使用ONE-Step熒光素酶檢測系統進行熒光素酶檢測：
每孔加入50 ?l ONE-Step熒光素酶試劑，并在室溫下搖動約15分鐘。使用熒光素酶檢測儀測量發光。
6. 數據分析：從所有孔的發光讀數中減去平均背景發光（無細胞對照孔）。
NFAT熒光素酶報告基因表達的誘導倍數 = 刺激孔的背景減去發光/未刺激對照孔的平均背景減去發光。
圖1. NFAT報告基因（熒光素酶）-HEK293細胞對TCR交聯劑伊諾莫辛與PMA的反應。
B. NFAT報告基因-HEK293細胞對TCR交聯劑抑制劑的反應。
1. 在生長培養基1B中收獲NFAT報告基因-HEK293細胞，并將細胞以每孔約30,000個細胞的密度播種到含有45 ?l檢測培養基的白色透明底部96孔微孔板中。
2. 將板在37°C的CO2培養箱中培養過夜（約18-24小時）。
3. 將抑制劑（RO-31-8220）稀釋到檢測培養基中，達到所需最終濃度的10倍，并每孔加入5 ?l稀釋液。最終DMSO濃度可高達0.5%。
向未抑制對照孔中加入相同濃度DMSO但不含抑制劑的5 ?l檢測培養基。
4. 將TCR交聯劑（PMA與伊諾莫辛）稀釋到檢測培養基中，達到所需最終濃度的10倍（我們建議從30 nM PMA和1 ?M伊諾莫辛的起始濃度開始）并每孔加入5 ?l稀釋液。最終DMSO濃度可高達0.5%。
向未刺激對照孔中加入相同濃度DMSO但不含交聯劑的5 ?l檢測培養基。
向無細胞對照孔中加入含DMSO的55 ?l檢測培養基（用于確定背景發光）。
每個處理至少設置三次重復。
5. 將細胞在37°C的CO2培養箱中培養過夜（約18小時）。
第二天，使用ONE-Step熒光素酶檢測系統進行熒光素酶檢測：
每孔加入55 ?l One-Step熒光素酶試劑，并在室溫下搖動約15分鐘。使用熒光素酶檢測儀測量發光。
6. 數據分析：從所有孔的發光讀數中減去平均背景發光（無細胞對照孔）。
通過將每種條件除以刺激孔的背景減去發光來計算NFAT熒光素酶報告基因表達的百分比。在沒有RO-31-8220的情況下，用1 ?M伊諾莫辛和30 nM PMA刺激的細胞的背景減去發光被設為100%。
圖2. RO-31-8220抑制PKC在PMA和伊諾莫辛誘導的NFAT報告基因（熒光素酶）-HEK293細胞中的作用。
結果以發光百分比顯示。在沒有RO31-8220的情況下，用1 ?M伊諾莫辛和30 nM PMA刺激的細胞的背景減去發光被設為100%。
BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認證的生命科學領域的供應商，公司一直致力于開發藥物研發領域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創立，從創立至今一直致力于提供藥物研發領域的創新解決方案，以推動新的藥物發現。公司主要關注的領域包括免疫療法、表觀遺傳學、CRISPR、細胞信號轉導等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。
作為BPS Bioscience在中國的區域代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BPS Bioscience以及客戶訂制化服務。
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