上海美析儀器有限公司
水稻苗中苯丙氨酸解氨酶（PAL）的應用方案
檢測樣品：黃化水稻幼苗
檢測項目：苯丙氨酸解氨酶
方案概述：引言：丙氨酸解氨酶（PAD對植物體的木質素、植保素、類黃酮、花青素等次生物質的形成起重要的調節作用，且與植物的抗病作用有一定的關系。本實驗了解測定苯丙氨酸解氨酶活性的原理和方法。關鍵詞：苯丙氨酸解氨酶、美析紫外
材料與儀器
UV-1800紫外可見分光光度計、冷凍高速離心機，旋渦混合器，恒溫水浴鍋等
材料：黃化水稻幼苗
試劑：0. 1 mol / L硼酸緩沖液（pH 8. 8）；0. 02 mol/ L 1 L-苯丙氨酸：稱取3.33 g/ L-苯丙氨酸溶于1000 mL 0. 1 mol/L"1 硼酸緩沖液（pH 8. 8）；7 mmol - 統基乙醇硼酸 緩沖液：0. 11 mL 藐基乙醇用 0. 1 mol/L-1 硼酸緩沖液溶解，并定容至 200 mL；聚乙烯毗咯 烷酮（PVP）。
實驗步驟
酶液制備：稱取黃化水稻幼苗 0.5 g, 先加 1.5 mL 預冷的提取液（即 7 mmol - L-1 蔬 基乙醇硼酸緩沖液）、過量的聚乙烯毗咯烷酮（PVPX 但不能太多，否則不易研磨）、少量石英 砂在冰浴下研磨成漿，再加 3.5 mL 預冷的提取液使其終體積為 5 mL。于 12 000 g 4°C 下離心15 min, 用吸管吸取上清液，即粗酶液。
酶活測定：
反應液包括：①0.02 mol - L_1 L-苯丙氨酸 1 mL；
②0.1 mol - L 1 硼酸緩沖液（pH 8. 8）2 mL；
③0.1 mL 粗酶液。
（對照以 0. 1 mL 疏基乙醇緩沖液代替酶液）
反應液用渦旋混合器混勻后立即在 290 nm 處測起始吸光度值，并精確計時。（每一樣品 重復兩組）將測定后的各管于 30 °C 水浴保溫 30 min, 再于 290 nm 處測定各管的吸光度值。 本實驗用UV-1800紫外可見分光光度計以每 30 min 在波長 290 nm 處吸光度值增加 0. 01 所需酶量為 1 個單位（U）。
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