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氨基酸衍生法數據大PK:OPA or 茚三酮,原來選它

時間:2022/6/15閱讀:1569
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氨基酸是構建生物機體的眾多生物活性大分子之一,是構建細胞、修復組織的基礎材料。它被人體用于制造抗體蛋白、血紅蛋白、酶和激素以維持和調節新陳代謝,是一切生命之源。

 

由于氨基酸的重要性,合適可靠的檢測方案將成為評估食品、飼料、藥物及生理樣品中氨基酸指標的重要選擇。

 

HPLC—柱后衍生法,50多年來作為氨基酸領域的重要檢測手段,因為其高效的測試準確性和重現性,深受廣大用戶的信賴。

氨基酸檢測在藥物、食品、飼料中的主要應用有

 

●   通過分析氨基酸組鑒定多膚和蛋白質;

●   原料藥和中間體中的雜質和有關物質的測定;

●   藥物中單個或總氨基酸的定量, 包括復雜基質中標記物的測定;

●   重組蛋白生產過程的控制;

●   確定氨基酸組成也是保證食品和飼料營養價值的必要條件;

●   用于產品質量及過程監測。

 


衍生方法介紹


Pickering Laboratories根據上述應用的檢測對象的不同,將衍生方法分為OPA衍生法和茚三酮衍生法,兩種方法都可以與任何氨基酸陽離子交換柱和洗脫液組合使用。其中我們稱為Trione ®的茚三酮試劑,也廣泛應用于氨基酸分析儀中。

 

OPA法與茚三酮法區別見下表:


氨基酸衍生法

 

_

Trione®劑分析法

OPA劑分析法

衍生試劑

 

TlOO-預混試劑 ;自生產日期起計算, 4個月保質期(950 ml/瓶)

 

TlOOC -預混試劑;自生產日期起計算, 4個月保質期(950 mL/瓶)

 

T200 - 2部分試劑,混合后使用,從生產之日起12個月保質期;4組/箱

(900mL/瓶)

OD104-氨基酸分析用OPA稀釋液;

 

O120-OPA試劑(5g/瓶)

 

3700-2000 -疏基化合物。(10g/瓶)

 

這三種產品都是用于氨基酸OPA分析法

適用樣品

 

一級和二級氨基酸

一級氨基酸

 

在與OPA反應之前需要檢測二級氨基酸氧化步驟。使用氧化步驟時,一級氨基酸的檢測靈敏度會有所降低。

檢測器

UV/VIS

FLD

儀器靈敏度

10 pmole (在色譜柱上)

2 pmole (在色譜柱上)

色譜柱&洗脫液

適用于任何陽離子交換柱氨基酸分析法

與任何用于氨基酸分析的陽離子交換柱配合使用

配置

單泵Ony×PCXI vector PCX+ 0.5 m L反應器

單泵Ony×PCX/ vector PCX+ 0.15 ml反應器。

 

*需要帶有0.5 mL和0.1 mL反應器的雙泵OnyxPCX來檢測二級氨基酸。 在此模式下, 初級氨基酸的靈敏度會降低。

 

 

色譜柱的選擇


 

                                圖1:鈉柱氨基酸分析選擇

 


 

                             圖2:鋰柱氨基酸分析選擇

 


 

                                    圖3:氨基酸標品

 

 


 

                                         圖4:豆粕樣品

 

 


 

                                  圖5:水解單克隆樣品

 

 

 

Pickering產品


 

 

 


完整解決方案


歐洲藥典8.0對于氨基酸的柱后衍生茚三酮法做了詳細的要求,藥典對于包括化學、 動物、 人或草藥來源的活性物質、賦形劑和制劑,順勢療法制劑,抗生素,制劑和容器等都有所要求。

 

Pickering Laboratories 將歐洲藥典作為測試依據,為客戶提供完整的氨基酸分析解決方案。

 

                   Pickering 柱后衍生儀

 


解決方案包括Onyx PCX/Vector PCX 柱后衍生儀器、分析柱、保護柱、緩沖液和Trione ®茚三酮試劑。并且對方法進行了優化, 在符合藥典各項體系適宜性要求的同時,提高了分析的靈敏度及分析效率。

 

 

                               Pickering全套試劑包

 

 

 

                         圖6:依據歐洲藥典8.0法測試氨基酸

 

 

 

關于Pickering Laboratories

 

 


美國Pickering Laboratories公司是僅有的專業提供人工測試體液和柱后衍生化學試劑、色譜柱、分析方法等柱后衍生分析整體解決方案的機構,其不斷創新及良好的信譽被眾多的美國政府機構如EPA、ATF、FDA、AOAC和著名的廠商所認可。

 

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