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Greer Labs 屋塵螨(HDM)過敏原-哮喘模型制備

閱讀:1484      發(fā)布時間:2024-2-29
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屋塵螨過敏原

背景簡介:

支氣管哮喘(bronchial asthma,簡稱哮喘)是一種以嗜酸性粒細胞、肥大細胞反應(yīng)為主的氣道變應(yīng)性炎癥和氣道反應(yīng)性為特征的疾病。由于哮喘的發(fā)病機制復雜,病因與發(fā)病機理尚不明了,臨床實驗受倫理及方法限制,因此需要通過構(gòu)建哮喘動物模型來研究疾病發(fā)生發(fā)展以及制定相應(yīng)治療措施。塵螨是最常見的空氣過敏原,全球85%的哮喘患者對塵螨過敏。屋塵螨是一種免疫復合物,能夠激活先天免疫和后天免疫應(yīng)答。研究表明,HDM中的蛋白酶,如胰蛋白酶樣酶,催過敏有促進作用,從而導致過敏幾天對塵螨的過敏反應(yīng)。
利用塵螨誘發(fā)動物建立哮喘模型,方法簡便,操作性強,且成功率高。

美國Greer 公司專注于過敏原檢測,提供各種動物、植物及食品、真菌等各種過敏原提取物。塵螨過敏原提取物,廣泛應(yīng)用于哮喘模型的制備。

產(chǎn)品信息:

英文名稱D.pteronyssinus

中文名稱屋塵螨

貨號XPB82D3A2.5  XPB82D3A25  XPB91D3A2.5  XPB91D3A25    XPB81D3A2.5  XPB81D3A25

規(guī)格2.5ml/25ml

產(chǎn)品應(yīng)用:

1.該產(chǎn)品為凍干粉,一般推薦客戶參照COA中的蛋白濃度做稀釋,客戶收到貨后用去離子水或蒸餾水稀釋至相應(yīng)工作濃度或儲液濃度。比如:2.5ml包裝的,加入2.5ml水,因為每個批次的蛋白含量有差異,可根據(jù)質(zhì)檢報告,計算終濃度??蛻粢部梢罁?jù)自身實驗要求,稀釋到任意濃度。

2.過敏原稀釋后,如果一次用不完,推薦分裝后-20℃保存(可分裝成使用濃度后保存)。可凍融一次,解凍后,在一周內(nèi)用完。

3.凍干粉過敏原效期為10年。

4.常見的兩個比較相似的產(chǎn)品:B82 B84,B82 B84,均只代表D.pteronyssinus,不是實際訂貨貨號,D.pteronyssinus產(chǎn)品分粗制品和凍干粉,實貨都是凍干粉。凍干粉是粗品進一步純化后的產(chǎn)品。B82B84在粗品階段,只在純度上有細微差別,貨號分別為:RMB82M RMB84M。凍干粉的D.pteronyssinus只有XPB82D3A2.5這一個貨號(是由粗品RMB82M純化后獲得。)

參數(shù)說明:

收到貨后,會有隨貨的質(zhì)檢報告(COA)。塵螨過敏原會有4個參數(shù)說明,其他類過敏原,如食物、花粉類等過敏原只有2個參數(shù)(干重和蛋白含量)說明

XPB82D3A2.5(Lot#385930)為例,參數(shù)說明:

1)純過敏原(Der P1): 是指純過敏原Der P1 的含量(當然這個提取物的組分不只是只有Der P1,也有其他形式的,這個是主要的過敏原成分)。154.17mcg/vial 表示 Der P1 的含量是:154.17ug/瓶,mcg, microgram 微克的縮寫。

2)干重(Dry Weight: 干重16.7mg,  是去除水分后,瓶子里粉末的含量。

3)總蛋白(Protein) :蛋白含量4.43mg, 是指:過敏原提取物的總蛋白含量。

4)內(nèi)毒素含量(Endotoxin):內(nèi)毒素水平。塵螨有一款低內(nèi)毒含量(做過內(nèi)毒素處理),貨號為:XPB91D3A2.5/ XPB91D3A25(之前XPB70D3A2.5/ XPB70D3A25已停產(chǎn)),要比未做過內(nèi)毒素處理的XPB82D3A2.5/ XPB82D3A25內(nèi)毒素含量相對低很多(并不是不含內(nèi)毒素)。

低內(nèi)毒素的一般用于做細胞實驗,但由于凍干過程中無法保證無菌,如果做細胞實驗,請做過濾除菌(0.22 um )。

注意:

1)塵螨是提取物,提取物是混合物,不是純蛋白。由于工藝和每批過敏原原料差異,因此每個批次含量(參數(shù))都不同。如果對含量有要求,特別是之前用過別的批次的,沒法保證和之前批次一致,請核對收到貨的COA,確認符合您的要求再開瓶。

2)過敏原提取物是混合物,不能作為標準品,如ELISA實驗中的標準品。

3)參考文獻中用過Greer 產(chǎn)品的,都沒有具體的是參照哪個參數(shù)?而且不同文獻用量差別也很大,因此沒有標準的方案推薦??蛻粜枰鶕?jù)自己的實驗摸索最佳的實驗條件。

如果以純過敏原(Der P1)的含量為基準,成本太高。

如果以:干重(Dry Weight)的含量為基準,實際其中的過敏原的比例太低,不足以致敏。

根據(jù)客戶實際使用經(jīng)驗,客戶驗證過參照Protein 含量做是可以的,因此我們一般推薦客戶以“蛋白含量 Protein"為基準,具體實驗條件客戶需要自己摸索。

關(guān)于稀釋、保存。

1) 過敏原提取物均為干粉包裝,不是液體包裝。規(guī)格里的2.5ml 25ml 指的是瓶裝規(guī)格。

客戶可以根據(jù)實際工作濃度,用蒸餾水稀釋到儲液濃度,比如:蛋白含量是:4.43mg,用:2.5ml 蒸餾水稀釋后,濃度就是:4.43mg/2.5ml=1.772mg/ml。

2) 塵螨干粉效期是10年,干粉室溫或4℃保存。稀釋后分裝-20℃凍存(保證濃度在:0.1mg/ml以上),效期1年。

注意事項:

1.  蛋白含量不是重量, 不要用天平去稱量,這個蛋白含量的測定COA里有說明,是Bradford法測定的,請不要用天平去稱量。如果用天平去稱量了,會導致無法定量,請不要做此操作。例如:您要用50ug 的量,那您可以根據(jù)您稀釋后的濃度(比如:1.772mg/ml),可以根據(jù)這個算出您取多少體積的量就可以了。這樣是可以準確定量的。

2.  玻璃瓶易碎,請不要置于-80℃保存。

結(jié)果示例

CT.png

產(chǎn)品引用文獻:

GREER WEN.png

更多產(chǎn)品詳情,請垂詢Greer Labs 中國區(qū)總代理北京博蕾德生物科技有限公司。


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