凝膠成像系統七大作用
閱讀:5047 發布時間:2019-10-12
凝膠成像系統七大作用:
1、圖象攝取
凝膠成像系統采用數碼攝影將攝取的圖象直接輸入計算機系統。在暗箱中的紫外燈照射下,通過調節變焦光圈、變焦倍數及焦距使樣品清晰及大小適當。圖象攝取獲得以后,通過圖象處理軟件軟件中圖象處理菜單的“亮度”和“優化”項進行亮度調整和圖象優化,以降低圖象本底噪聲。
凝膠成像系統經過這樣處理以后能得到清晰的凝膠圖片,同時在圖象中加入文字信息進行適當注釋,用熱敏打印機或現在常用的高品質照片級噴墨打印機打印以后,可以得到符合文章發表要求的照片打印。
2、分子量定量
對于一般常用的DNA膠片,利用凝膠成像系統的圖象處理軟件中分子量定量功能,通過對膠上DNAMarker條帶的已知分子量注釋,自動生成擬合曲線,并以它衡量得到未知條帶的分子量。通過這種方法所得到的結果較肉眼觀察估計要準確很多。
3、密度定量
一般常用的測定DNA(脫氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)濃度的方法是紫外吸收法,但它只能測定樣品中的總核苷酸濃度,而不能區分各個長度片段的濃度。但利用凝膠成像系統和圖象處理軟件軟件,對于DNA膠片上某一已知其DNA含量的標準條帶,在調節閥值和積分框并進行密度標定以后,可以方便的單擊其他未知條帶根據其光密度值得到其DNA含量。
凝膠成像系統比紫外吸收法方便,可以測出不同長度的片段的含量,而所得結果對于分子生物學操作要求的準確度是足夠的。值得指出的是,凝膠成像系統也適用于對PAGE蛋白膠條帶的濃度測定。
4、密度掃描
在分子生物學和生物工程研究中,常用到的是對蛋白表達產物占整個菌體蛋白的百分含量的計算。傳統的方法是利用的密度掃描,但利用生物分析軟件結合現在實驗室常規配備的掃描儀或者直接用白光照射的凝膠成像系統就能完成此項工作。
選擇凝膠成像系統的密度掃描命令,可以將代表某一微生物菌株的泳道圖象用虛線框住以后,即可得到對此區域的縱向掃描曲線圖。一般選擇自動積分選項可以自動計算出對應于各個膠帶的每個峰面積相對于整個曲線所占的百分比,也可以選手動積分,人工選擇積分區域,對于某些條帶較弱,本底較高的圖譜可以進行基線調整,在誤差的允許范圍內得到更佳的實驗結果。
5、PCR定量
PCR定量主要是指,當做PCR實驗時如果擴增出來的條帶不是一條時,利用此命令可以計算出各個條帶占總體的相對百分數,凝膠成像系統這個功能與密度掃描類似,但實際在原理上并不相同。PCR定量并不對選擇區域生成縱向掃描曲線圖并積分,而是對選定的幾條帶進行相對密度定量并計算其占總和的百分數。
凝膠成像系統在分子生物學和生物工程研究中幾乎每天都要遇到的研究工作中所具有的功能,由于結合生物處理軟件可以覆蓋現代生物科學日常研究的各個領域并能夠取代某些實驗設備,凝膠成像系統應該是現代分子生物學和其他生物科學實驗室的常備儀器,不僅如此,它也能用于醫學臨床檢驗。