凝膠成像系統常見的測量應用
閱讀:1355 發布時間:2020-12-18
凝膠成像系統:對蛋白質或核酸凝膠進行觀察、成像的實驗儀器,并可進行分子量計算、含量計算、密度分析等半定量分析。
總體上來說凝膠成像可應用于:凝膠成像系統可以用于:蛋白質、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的分離純化結果作定性分析。
凝膠成像系統的常見的測量應用:
(1)分子量定量
對于一般常用的DNA膠片,利用分子量定量功能,通過對膠上DNAMarker條帶的已知分子量注釋,自動生成擬合曲線,并以它衡量得到未知條帶的分子量。通過這種方法所得到的結果較肉眼觀察估計要準確很多。
(2)密度定量
一般常用的測定DNA(脫氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)濃度的方法是紫外吸收法,但它只能測定樣品中的總核苷酸濃度,而不能區分各個長度片段的濃度。利用凝膠成像系統和軟件,先將DNA膠片上某一已知其DNA含量的標準條帶進行密度標定以后,可以方便的單擊其他未知條帶,根據與已知條帶的密度做比較,可以得到未知DNA的含量。此方法也適用于對PAGE蛋白膠條帶的濃度測定。
(3)密度掃描
在分子生物學和生物工程研究中,常用到的是對蛋白表達產物占整個菌體蛋白的百分含量的計算。傳統的方法是利用的密度掃描,但利用生物分析軟件結合現在實驗室常規配備的掃描儀或者直接用白光照射的凝膠成像就能完成此項工作。
(4)PCR定量
PCR定量主要是指,如果PCR實驗擴增出來的條帶不是一條,那么可以利用軟件計算出各個條帶占總體條帶的相對百分數。就此功能而言,與密度掃描類似,但實際在原理上并不相同。PCR定量是對選定的幾條帶進行相對密度定量并計算其占總和的百分數,密度掃描時并對選擇區域生成縱向掃描曲線圖并積分。
上海培清化學發光凝膠成像可對對ECL發光等直接曝光成像,并獲得實驗結果。以往實驗室主要使用暗室曝光壓片進行ECL檢測,但建造暗室成本高而且浪費實驗室空間,曝光步驟繁瑣,沖洗X膠片時還會接觸到有毒的化學試劑。化學發光成像系統的使用已經逐漸取代傳統的暗室壓片曝光檢測。