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北京西美杰科技有限公司
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- 2024-08-15 21:00:06
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- 2024年8月15日--2025年2月15日
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KERRY Sheff-Vax非動物源復合添加物在疫苗研發(fā)和生產(chǎn)中的應用
蛋白水解物因可以提高各種生物制藥生產(chǎn)系統(tǒng)的整體性能而常被用于生產(chǎn)工藝中，比如改善細胞活力、提高細胞增殖和目的蛋白產(chǎn)量、提高病毒培養(yǎng)滴度等等。然而，在一個限定系統(tǒng)中，可能難以同時觀察到這些作用，因為每種細胞培養(yǎng)平臺都是*的，作為培養(yǎng)基添加物的蛋白水解物也是如此。每種水解物對細胞的生長和生產(chǎn)力都具有不同的作用并會受到多種因素的影響，如細胞系、生產(chǎn)水解物的原材料、生產(chǎn)工藝、水解物用量以及基礎培養(yǎng)基的成分等等。
為了滿足市場需求，西美杰代理的KERRY品牌從上世紀以來，充分利用在細胞培養(yǎng)基添加物領(lǐng)域中先進的技術(shù)與專業(yè)積累，開發(fā)出了一系列非動物源復合添加物系統(tǒng)，大大提升了各類細胞系的性能，能有效降低生產(chǎn)成本、簡化篩選工藝，滿足了生物制品領(lǐng)域客戶的生產(chǎn)和監(jiān)管要求。
KERRY非動物源復合添加物系統(tǒng)優(yōu)勢特點：
- 功能更加強大——集合了KERRY傳統(tǒng)產(chǎn)品中植物蛋白水解物和成分明確添加物二者在培養(yǎng)效果上的優(yōu)點；
- 產(chǎn)品線更加合理——根據(jù)客戶對下游純化要求的不同，分別開發(fā)出了含有生長因子的增強版和對下游純化無影響的無蛋白版本；
- 針對性更強——對于CHO細胞、雜交瘤細胞、禽類細胞、昆蟲細胞以及常用于疫苗生產(chǎn)的各類細胞系都有專門對應的復合添加物產(chǎn)品。
本文中小編將重點為大家介紹常用于疫苗研發(fā)和生產(chǎn)的Sheff-Vax系列復合添加物。
- Sheff-Vax復合添加物介紹
Sheff-Vax復合添加物是一類成分復雜、不含動物源成分（ACF）的培養(yǎng)基添加物系統(tǒng)，根據(jù)是否不含蛋白（PF）、添加微量元素（Plus）等各類主要成分的差異，分為以下五個產(chǎn)品（見下表）。Sheff-Vax作為細胞培養(yǎng)基的添加成分，能部分或*替代血清，為多種類型細胞（如BHK、Vero、SF-9、MDCK、MRC5等）提供生長和生產(chǎn)所需的各類營養(yǎng)，包括氨基酸、多肽、碳水化合物、維生素、微量元素等，不僅能顯著提升細胞生長狀態(tài)，還能提高病毒產(chǎn)量，因而常常被用于病毒疫苗的研發(fā)和生產(chǎn)。Sheff-Vax系列添加物已經(jīng)在多個上市疫苗生產(chǎn)工藝中被添加和使用，如口蹄疫疫苗、戊肝疫苗、流感疫苗等，也是全球多家細胞培養(yǎng)基生產(chǎn)商的常用原料之一。
產(chǎn)品名稱 | 特點與應用 |
Sheff-Vax ACF | 一種成分復雜的培養(yǎng)基添加物，含有生長因子，可顯著減少如MDCK、BHK-21和HEK293等細胞培養(yǎng)時的血清使用量。6-8g/L添加量即可滿足細胞在DMEM和GMEM培養(yǎng)基中貼壁或懸浮培養(yǎng)的需求，效果優(yōu)于*使用血清培養(yǎng)的細胞。 |
Sheff-Vax Plus ACF | 與Sheff-Vax ACF相比添加了各種微量元素，賦予細胞旺盛的生長力，同時增加細胞的蛋白產(chǎn)量和存活時間。Sheff-Vax Plus ACF配合基礎培養(yǎng)基使用，可以使MDCK、BHK-21等細胞實現(xiàn)*無血清的懸浮培養(yǎng)。 |
Sheff-Vax PF ACF | 是Sheff-Vax ACF的無蛋白版本，不含完整無損的蛋白質(zhì)，適用于對下游純化有特別要求的細胞培養(yǎng)。分批培養(yǎng)時，推薦添加量為7-9g/L。 |
Sheff-Vax Plus PF ACF | 是Sheff-Vax Plus ACF的無蛋白版，不含完整無損的蛋白質(zhì)，適用于對下游純化有特別要求的細胞培養(yǎng)。分批培養(yǎng)時，推薦添加量為7-9g/L。 |
Sheff-Vax Plus PF ACF VP | 是一款無動物源成分、無蛋白的培養(yǎng)基添加物，用于疫苗生產(chǎn)的病毒繁殖階段，提高病毒滴度的同時限制蛋白的表達，方便下游病毒純化。該產(chǎn)品在貼壁或懸浮細胞中推薦添加量為6-8g/L。 |
*注：ACF - Animal Component Free不含動物源成分；PF - Protein Free不含蛋白質(zhì)；Plus – 含有微量元素。
- 如何選擇和使用Sheff-Vax添加物
在實際應用中發(fā)現(xiàn)，上述五種Sheff-Vax添加物對不同類型細胞系的適用性表現(xiàn)也有一定差異，我們可以根據(jù)下表來選擇和測試合適的Sheff-Vax添加物。對于使用商品化無血清培養(yǎng)基和其他培養(yǎng)基的客戶，Sheff-Vax添加物系統(tǒng)也可以用來優(yōu)化培養(yǎng)基，提高細胞生產(chǎn)效率和促進細胞增長。這種情況下無需馴化細胞，Sheff-Vax可直接添加到無血清培養(yǎng)基中。Sheff-Vax添加物的高活性和穩(wěn)定性，使其可以應用于大多數(shù)商業(yè)培養(yǎng)基。
添加物 | 細胞系 | |||||||||
HEK | Vero | PerC6 | MRC-5 | BHK | CEF | MDCK | SF-9 | High-five | S2 | |
Sheff-Vax ACF | ● | ● | ★ |
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| ★ |
| ★ | ★ | ★ |
Sheff-Vax Plus ACF | ● | ● | ★ | ● |
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| ★ | ★ | ★ | ★ |
Sheff-Vax PF ACF | ● | ● | ★ |
| ★ | ★ |
| ★ | ★ | ★ |
Sheff-Vax Plus PF ACF | ● | ● | ★ |
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| ★ | ★ | ★ |
Sheff-Vax Plus PF ACF VP | ★ | ★ | ★ | ★ | ★ | ★ | ★ | ★ | ★ | ★ |
*注：● 有效；★ *。
Sheff-Vax添加物的配置方法
使用Sheff-Vax添加物替代血清的培養(yǎng)過程中，需要先進行細胞馴化，逐代降低血清濃度，同時增加Sheff-Vax添加物濃度，進而實現(xiàn)降低或*去除血清和其他動物源成分的培養(yǎng)方案，如下表所示。
細胞傳代次數(shù) | 對照組 | 馴化組 |
1 | 100%對照培養(yǎng)基 | 100%對照培養(yǎng)基 + 0%馴化培養(yǎng)基 |
2 | 100%對照培養(yǎng)基 | 75%對照培養(yǎng)基 + 25%馴化培養(yǎng)基 |
3 | 100%對照培養(yǎng)基 | 50%對照培養(yǎng)基 + 50%馴化培養(yǎng)基 |
4 | 100%對照培養(yǎng)基 | 25%對照培養(yǎng)基 + 75%馴化培養(yǎng)基 |
5 | 100%對照培養(yǎng)基 | 0%對照培養(yǎng)基 + 100%馴化培養(yǎng)基 |
*注：對照培養(yǎng)基：基礎培養(yǎng)基+10% FBS； 馴化培養(yǎng)基：基礎培養(yǎng)基+Sheff-Vax添加物。
- Sheff-Vax添加物應用案例
1）使用Sheff-Vax Plus PF ACF對BHK細胞的降血清馴化案例
BHK細胞降血清培養(yǎng)生長曲線對比
該馴化培養(yǎng)過程添加了Sheff-Vax Plus PF ACF來降低BHK 培養(yǎng)基中FBS的使用量，把FBS濃度從10%降低到0.5%依然可以保持很好的細胞生長狀態(tài)。（注：在整個馴化傳代過程中，培養(yǎng)基需要添加0.5%的PluronicF-68來防止細胞凝聚成團。）
2）使用Sheff-Vax ACF對Vero細胞的無血清馴化案例
使用Sheff-Vax添加物可以實現(xiàn)Vero細胞的無血清培養(yǎng)，在逐步減少血清用量直至*去除血清后，Vero細胞生長形態(tài)無顯著變化（見下圖）。
Vero細胞生長形態(tài)對比
（A）對照組：DMEM+10%胎牛血清；
（B）實驗組：DMEM+0%胎牛血清+2g/L Sheff-Vax ACF+10mg/L rInsulin。
每次傳代逐步減少FBS，同時添加Sheff-Vax ACF，在相同培養(yǎng)時間內(nèi)，無血清組細胞生長密度可達到10% FBS組細胞密度峰值的一半，延長培養(yǎng)時間還可以獲得更高的細胞密度（見下圖）。
Vero細胞生長曲線對比
(i) 10% FBS, (ii) 7.5% FBS, (iii) 5% FBS,(iv) 2.5% FBS, (v) 1.5% FBS, (vi) 1% FBS, (vii) 0.5% FBS, (viii) 0.25% FBS, (ix) 0.1% FBS, (x) 0% FBS
3）添加Sheff-Vax可以獲得更高的病毒滴度
分別在培養(yǎng)狂犬病毒和麻疹病毒的細胞培養(yǎng)基中添加不同的Sheff-Vax產(chǎn)品，與對照組相比均能有效提升病毒生產(chǎn)滴度。在病毒增殖階段添加Sheff-Vax Plus PF ACF VP對病毒滴度也有顯著的提升（見下圖）。
添加Sheff-Vax培養(yǎng)的病毒滴度對比
綜上所述，Sheff-Vax復合添加物在疫苗研發(fā)生產(chǎn)過程中具有非常多的優(yōu)勢，主要表現(xiàn)為：
Sheff-Vax是一系列非常適用于細胞疫苗生產(chǎn)的非動物源添加物；
Sheff-Vax具有可靠的批間一致性；
Sheff-Vax能發(fā)揮出與血清相同的生物學功能；
Sheff-Vax能有效提升病毒疫苗的生產(chǎn)效率；
Sheff-Vax的高性價比能顯著降低生產(chǎn)成本。
KERRY Sheff-Vax非動物源復合添加物在疫苗研發(fā)和生產(chǎn)中的應用
北京西美杰是KERRY授權(quán)的中國區(qū)代理，為各大科研院所，研究機構(gòu)、企業(yè)等客戶提供高品質(zhì)產(chǎn)品與服務，也收到廣大客戶的*。北京西美杰是KERRY代理，KERRY中國代理，KERRY北京代理，KERRY總代理，KERRY上海代理，KERRY全國代理，KERRY西北代理，KERRY西南代理，KERRY東北代理，KERRY華北代理，KERRY華南代理，KERRY華中代理
