目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC1925-100T/48S土壤淀*酶檢測試劑盒 微量法
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100T/48S |
| 貨號 | BC1925 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,農業,綜合 |
| 主要用途 | 測定意義：淀*酶（EC3.2.1.1）是催化淀粉水解的一類酶的總稱。土壤中的淀粉 |
土壤淀*酶（S-AL）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC1925
規格：100T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
溶液的配制：
1、 試劑二：臨用前取1瓶加入5 mL蒸餾水，置于常溫水中并加熱至煮沸，期間不斷攪拌或震蕩至粉劑溶解，用不完的試劑2-8℃保存一周。
2、 標準品：10 mg麥芽糖。臨用前加入1.38 mL蒸餾水配制成20 μmol/mL的儲備液，2-8℃保存兩周。
產品說明：
淀*酶（EC3.2.1.1）是催化淀粉水解的一類酶的總稱。土壤中的淀*酶主要來自于微生物，是一種重要的酶制劑，廣泛應用于糧食加工、食品、釀造、發酵、紡織品工業和醫藥行業。
淀*酶水解淀粉產生還原糖，可與3,5-二硝基水楊酸反應生成紅棕色物質，在540nm處有特征吸收峰，顏色深淺在一定范圍內與還原糖量成正比。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
天平、恒溫培養箱/水浴鍋、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、30~50目篩、研缽、甲苯（不允許快遞）。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
新鮮土樣自然風干或37℃烘箱風干，過30~50目篩。
二、測定步驟
1. 分光光度計/酶標儀預熱30min，波長調至540nm，分光光度計用蒸餾水調零。
2. 將20μmol/mL的麥芽糖儲備液用蒸餾水稀釋為 2、1、0.8、0.6、0.4μmol/mL的標準溶液備用。
3. 標準品濃度稀釋表
序號 | 稀釋前濃度（µmol/mL） | 標準液體積（µL） | 蒸餾水體積（µL） | 稀釋后濃度（µmol/mL） |
1 | 20 | 100 | 900 | 2 |
2 | 2 | 500 | 500 | 1 |
3 | 1 | 400 | 100 | 0.8 |
4 | 1 | 300 | 200 | 0.6 |
5 | 1 | 200 | 300 | 0.4 |
備注：實驗中每個標準管需60µL標準溶液。
4. 操作表：
試劑名稱 | 測定管 | 對照管 | 標準管 | 空白管 |
土樣（g） | 0.05 | 0.05 | - | - |
甲苯（μL） | 10 | 10 | - | - |
蒸餾水（μL） | - | 100 | ||
試劑一（μL） | 100 | 100 | - | - |
試劑二（μL） | 100 | - | - | - |
- | - | |||
上清液（μL） | 60 | 60 | - | - |
蒸餾水（μL） | - | - | - | 60 |
標準溶液（μL） | - | - | 60 | - |
試劑三（μL） | 140 | 140 | 140 | 140 |
充分混勻，沸水浴10min，置于冰上冷卻，于微量玻璃比色皿/96孔板中測定540nm處的吸光值，分別記為A測定管、A對照管、A標準管和A空白管，計算ΔA測定=A測定管-A對照管，ΔA標準=A標準管-A空白管。（標準曲線和空白管只需測1-2次） | ||||
三、土壤淀*酶活力的計算
1、標準曲線的繪制：
根據標準管的濃度（x，μmol/mL）和吸光度ΔA標準（y，ΔA標準），建立標準曲線。根據標準曲線，將ΔA測定（y，ΔA測定）帶入公式計算樣本濃度（x，μmol/mL）
2、酶活的計算：
單位的定義：每天每g土樣產生1μmol還原糖定義為一個土壤淀*酶活力。
S-AL（U/g 土樣）= x×V反總÷W÷T=0.21×x÷W
V反總：酶促反應總體積，0.21mL；W：土樣質量，g；T：反應時間，1d。
注意事項：
1、 當ΔA大于1.5時，建議將上清液稀釋后再進行測定，注意在計算公式中乘以稀釋倍數。
2、 若ΔA測定較小，增加反應的上清液體積或適當增加酶促反應時間，計算酶活時對公式進行修改。
3、 建議每次實驗煮沸后的冷卻時間保持一致，吸光值請于30min內測定完成。
實驗實例：
1、 取0.05g土樣于1.5mLEP管中，依次加入10μL甲苯、100μL試劑一、100μL試劑二為測定管；取0.05g土樣于1.5mLEP管中，依次加入10μL甲苯、100μL試劑一、100μL蒸餾水為對照管，均放于37℃培養24h，后離心取上清再液稀釋3倍，之后按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA測定 =A測定管-A對照管=0.948-0.12=0.828，標準曲線：y=0.7604x-0.158，x=1.297，按土樣質量計算酶活得：
S-AL（U/g 土樣）=0.21×x÷W×3（稀釋倍數）=0.21×1.297÷0.05×3（稀釋倍數）=16.34 U/g 土樣。
參考文獻：
[1] Kathiresan K, Manivannan S. α-Amylase production by Penicillium fellutanum isolated from mangrove rhizosphere soil[J]. African journal of Biotechnology, 2006, 5(10).
[2] Ebregt A, Boldewijn J. Influence of heavy metals in spruce forest soil on amylase activity, CO 2 evolution from starch and soil respiration[J]. Plant and Soil, 1977, 47(1): 137-148.
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