目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC5215-100T/48S谷*酸（Glu）含量檢測試劑盒
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100T/48S |
| 貨號 | BC5215 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,農業,綜合 |
| 主要用途 | 谷*酸（Glu）含量檢測 |
谷*酸（Glu）含量檢測試劑盒說明書（WST法）
微量法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC5215
規格：100T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
試劑一 | 液體85mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體1.5 mL×1支 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 粉劑×2瓶 | -20℃保存 |
試劑四 | -20℃保存 | |
試劑五 | 液體4mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準液 | 液體0.5 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑三：臨用前取1瓶加入6mL試劑一，用不完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復凍融；
2、 試劑四：臨用前取1支加入0.5 mL試劑二，用不完的試劑-20℃分裝保存2周，避免反復凍融；
3、 標準液：10 μmol/mL谷*酸標準品。
產品說明：
Glu廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，不僅是組成蛋白質的20種氨基酸之一，而且通過轉氨基作用參與多種氨基酸合成，是生物體內主要氨基來源之一。此外，Glu還是味精的主要有效成分，常用做食品添加劑以及香料生產。
谷*酸脫氫酶（GDH）催化谷*酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADH和NH4+，在1-mPMS作用下，WST-1可與NADH 反應，產生水溶性formazan，計算谷*含量。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/超聲破碎儀、冰、蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
細菌、細胞：收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每500萬細菌或細胞加入1mL試劑一，超聲波破碎細菌或細胞（功率200w，超聲3s，間隔10s，重復30次），10000g，常溫離心10min，取上清待測。
組織：稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一，進行冰浴勻漿，10000g，常溫離心10min，取上清待測。
液體：直接測定。（若有渾濁則離心后取上清測定）
二、測定步驟
1. 分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節波長至450nm，分光光度計蒸餾水調零。
2. 標準溶液的制備：將標準品用蒸餾水分別稀釋為0.625，0.3125，0.15625，0.07813，0.039、0.0195、0.01、0.005、0.0025μmol/mL的標準溶液。
3. 標準品稀釋表：
序號 | 稀釋前濃度（µmol/mL） | 標準液體積（µL） | 蒸餾水體積（µL） | 稀釋后濃度（µmol/mL） |
1 | 10 | 50 | 750 | 0.625 |
2 | 0.625 | 200 | 200 | 0.3125 |
3 | 0.3125 | 200 | 200 | 0.15625 |
4 | 0.15625 | 200 | 200 | 0.07813 |
5 | 0.07813 | 200 | 200 | 0.039 |
6 | 0.039 | 200 | 200 | 0.0195 |
7 | 0.0195 | 200 | 200 | 0.01 |
8 | 0.01 | 200 | 200 | 0.005 |
9 | 0.005 | 200 | 200 | 0.0025 |
實驗中每個標準管需40µL標準溶液。
4. 操作表：
試劑（μL） | 測定管（A2） | 對照管（A1） | 標準管 | 空白管 |
標準品 | - | - | 40 | - |
蒸餾水 | - | - | - | 40 |
樣品 | 40 | 40 | - | - |
試劑一 | - | 170 | - | 170 |
試劑三 | 160 | - | 160 | - |
試劑四 | 10 | - | 10 | - |
試劑五 | 30 | 30 | 30 | 30 |
混勻，37℃避光反應30min。200μL至微量比色皿/96孔板中，在450nm下讀取對照管吸光值A1、測定管A2。計算ΔA=A2-A1。ΔA標準=A標準-A空白管。（標準管和空白管只需做1-2次），每個測定管需要設定一個對照管。 | ||||
三、谷*酸含量計算
1. 標準曲線的繪制：
根據標準管的濃度（x，µmol/mL）和吸光度ΔA標準（y，ΔA標準），建立標準曲線。根據標準曲線，將ΔA代入方程得到x（µmol/mL）。
2. 谷*酸含量計算：
（1）按照蛋白濃度計算：
谷*酸含量（µmol/mg prot）=x×V樣本÷（Cpr×V樣本）=x÷Cpr
（2）按照樣本質量計算：
谷*酸含量（µmol/g 質量）=x×V樣本÷（W÷V樣總×V樣本）=x÷W
（3）按照細菌或細胞數量計算：
谷*酸含量（μmol/104 cell）=x×V樣本÷（500÷V樣總×V樣本）=0.002x
谷*含量（μmol/mL）=x×V樣本÷V樣本=x
V樣總：加入提取液體積，1mL；V樣本：加入的樣本體積，0.04mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。
注意事項：
1、如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進行測定。
實驗實例：
1、稱取約 0.1g 鼠肺，加入 1mL試劑一，冰浴研磨，10000g，常溫離心10min取上清，待測。之后按照測定步驟操作，用 96 孔板測得計算 ΔA =A2 -A1=0.449-0.384=0.065，標準曲線y=1.5338x+0.0091，根據標曲得出x=0.036，谷*酸含量得：
*氨酸含量（µmol/g 質量）=x×V樣本÷（W÷V樣總×V樣本）=x÷W=0.36µmol/g。
2、吸取0.04 mL羊血清，按照測定步驟操作，用 96 孔板測得計算ΔA =A2-A1=0.379-0.105=0.274，標準曲線y=1.5338x+0.0091，根據標曲得出x=0.173，谷*酸含量得：
谷*酸含量（μmol/mL）=x×V樣本÷V樣本=x=0.173μmol/mL。
[1] Yanan Wang,Chengzhen Liang,Zhigang Meng,et al. Leveraging Atriplex hortensis choline monooxygenase to improve chilling tolerance in cotton. Environmental and Experimental Botany. June 2019;162:364-373.(IF3.712)
參考文獻：
[1] Beck R, Malthe-S?renssen D, Andreassen J P. Polycrystalline growth in precipitation of an aromatic amine derivative and l-glutamic acid[J]. Journal of crystal growth, 2009, 311(2): 320-326.
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