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1. 檢測辦法
酶可以結合在一抗上,也可以結合在二抗上,還可以運用鏈霉親和素符號的酶與親和素符號的一抗結合。
此外ELISA的成果檢測還包含放射性檢測、熒光檢測、化學發光或顯色法檢測等。
現在檢測ELISA有許多途徑,我們可以依據自己的偏好進行挑選。
一般ELISA檢測的是酶促反響的可溶性產品,抗體上結合有相應的酶(例如一般運用的辣根過氧化物酶HRP),而反響體系中增加有相應的底物(如3,3-二氨基聯苯胺DAB)。
這種酶促反響生成具有特征性的色彩,可以通過分光光度計進行檢測,堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。
2. 剖析抗體類型
單克隆抗體和多克隆抗體都可以用于ELISA試劑盒,實際上有時候二者結合作用更好。例如,關于雙抗夾心法而言,用多抗進行捕獲而單抗進行檢測有時更有協助。
多抗可以確保捕獲一切抗原,隨后單抗再特異性檢測擁有特定抗原表位的抗原。
3. 穿插發生的反響
假如抗體間發生沖突或穿插反響就會影響整個試驗的特異性。其間抗體來歷所帶來的兼容性就是穿插反響的一個要素。
雖然現在購買源自動物的抗體越來越簡單,我們仍有必要承認一下是否會發生穿插反響的問題。在用雙抗夾心法進行ELISA檢測時,檢測用的二抗有必要特異性針對檢測一抗,而不能與捕獲抗體起反響。
假如檢測用二抗與捕獲抗體結合,試驗特異性就會大打折扣。一般我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測一抗,來防止上述問題。
4、試劑盒的試驗類型
ELISPOT有點像蛋白印跡Western blot,先在帶膜的微孔板中培育細胞,然后在膜上檢測細胞排泄的抗原構成斑駁。此外,我們還需求依據自身需求挑選96孔板或是384孔板進行ELISA試驗。
還有兔、豬、猴、雞、鴨、羊、植物等多種種屬ELISA試劑盒,一切試劑盒通過充沛驗證,確保有效且重復性佳。
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