豬圓環(huán)病毒2型ELISA抗體檢測試劑盒說明書
1 符合率試驗(yàn)
PCV2 ELISA與間接免疫熒光檢測方法（IIF）的比較
由上表結(jié)果顯示ELISA方法陽性檢出率為63.3% ,陰性檢出率為36.7%；而用豬2型圓環(huán)病毒間接免疫熒光試驗(yàn)陽性檢出率為59.2%,陰性檢出率為40.8%。其中兩種方法檢測陽性符合率為90.3%,陰性符合率為94.4%，總符合率為91.8% 。表明ELISA在測定抗體效價時較為敏感。
注：間接免疫熒光檢測方法（IIF）是實(shí)驗(yàn)室檢測圓環(huán)病毒經(jīng)典方法。
PCV2 ELISA與荷蘭塞迪的捕獲ELISA試劑盒（商品化）的比較
用PCV2 ELISA試劑盒檢測117份豬血清，結(jié)果陽性率為72.65% ，陰性率為28.35%。對比國外試劑盒檢測結(jié)果，陽性率為70.94%，陰性率為29.06%。陽性符合率為64.96%，陰性復(fù)核率為21.37%，總符合率為86.32%。
注；荷蘭塞迪的捕獲ELISA試劑盒（商品化）在國內(nèi)使用的比較少，其效果還有待驗(yàn)證。
豬圓環(huán)病毒2型ELISA抗體檢測試劑盒說明書
使用說明書
【簡介】
試劑盒由抗原包被的微孔板，酶標(biāo)羊抗豬IgG及其它試劑制成，應(yīng)用間接ELISA原理檢測豬血清中抗Ⅱ型圓環(huán)病毒ORF2蛋白的抗體。
【用途】
豬圓環(huán)病毒2型ELISA抗體檢測診斷試劑盒用于檢測豬血清中抗Ⅱ型圓環(huán)病毒ORF2蛋白的抗體。評估豬場圓環(huán)病疫苗免疫狀況。感染豬的血清學(xué)診斷。
【原理】
本試劑盒是采用豬圓環(huán)病毒2型ORF2基因的工程表達(dá)產(chǎn)物包被微孔板，在試驗(yàn)中，加入稀釋的對照血清和待檢血清，經(jīng)溫育后，若樣品中含有抗豬圓環(huán)病毒2型ORF2蛋白特異性抗體，則將與檢測板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶標(biāo)二抗，與檢測板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，在孔中加TMB底物液，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，加入HF溶液終止反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀630nm波長測定各反應(yīng)孔中的OD值。
【試劑盒主要成分】
1 包被抗原的微孔板 2塊 （96孔/塊）
2 陰、陽性對照血清 各1管 （1ml/管）
3 羊抗豬酶標(biāo)二抗 1瓶 （30ml/瓶）
4 20倍濃縮洗滌液 1瓶 （50ml/瓶）
5 底物A液、B液 各1瓶 （10ml/瓶）
6 終止液 1瓶 （10ml/瓶）
7 樣品稀釋液 1瓶 （50ml/瓶）
8 血清稀釋板 2塊 （96孔/板）
9 說明書 1張
【樣品制備】
取動物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。
【洗滌液配制】
使用前，濃縮的洗滌液應(yīng)恢復(fù)至室溫（25℃左右），并搖動使沉淀的鹽溶解（在37℃水中加熱5-10min），然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋（例如：每板用20 ml濃縮液加上380ml水），稀釋好的洗滌液在4℃可以存放7天。
【樣品稀釋】
在血清稀釋板中按1：40的體積稀釋待檢血清（195μl樣品稀釋液中加5μl待檢血清）。
注意：陽性和陰性對照1：4稀釋，（180μl樣品稀釋液中加60μl對照血清，吹打均勻）。
【注意事項(xiàng)】
1 試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫，使用后放回2-8℃。
2 不同批號試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時應(yīng)防止試劑污染。
3 不要用口移液。
4 TMB（底物液B）不要暴露于強(qiáng)光，避免接觸氧化劑。
5 檢測板拆封后避免受潮或沾水（未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中，應(yīng)盡快置于2-8℃）。
6 待檢血清樣品數(shù)量較多時，應(yīng)先使用血清稀釋板稀釋完所有要檢測血清，再將稀釋好的血清轉(zhuǎn)移到檢測板，使反應(yīng)時間一致。
7 濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶加熱使其溶解后再使用。
8 嚴(yán)格按照操作說明書可以獲得的結(jié)果，操作過程中移液，定時和洗滌等的全過程必須。
豬圓環(huán)病毒2型ELISA抗體檢測試劑盒說明書【操作步驟】
1 取檢測板（根據(jù)樣品多少可拆開分次使用），用稀釋好的洗滌液洗板2次（200µl/孔）每次靜置2分鐘后倒掉，再在干凈吸水紙上拍干。
2 取稀釋好的待檢樣品100μl加入到檢測板中；陰性對照和陽性對照各設(shè)2孔，每孔100μl；輕輕振勻孔中樣品（勿溢出），置37℃溫育30分鐘。
3 甩掉板孔中的溶液，用洗滌液洗板3次，200μl/孔，每次靜置3分鐘倒掉，再在干凈吸水紙上拍干。
4 每孔加羊抗豬酶標(biāo)二抗100μl，置37℃溫育30分鐘。
5 洗滌5次, 方法同3。切記每次在干凈吸水紙上拍干。
6 每孔先加底物液A一滴（50µl）、再加底物液B一滴（50µl），混勻，室溫（18℃-25℃）避光顯色10分鐘。
7 每孔加終止液1滴（50μl），10分鐘內(nèi)測定結(jié)果（檢測前在震蕩器上輕輕震動一下）。
【結(jié)果判定】 在酶標(biāo)儀上測各孔OD630值。試驗(yàn)成立的條件是陽性對照孔平均OD630值大于或等于1.0，陰性對照孔平均OD630值必須小于0.3。
樣品OD630值大于0.42，判為陽性；樣品OD630值在0.38到0.42之間，判為可疑；樣品OD630值小于0.38，判為陰性。
注意：用620 ~650納米波長測定結(jié)果均有效。
【貯 存】2-8℃避光保存
【有 效 期】6個月