小鼠腫瘤壞死因子酶聯免疫分析試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍：
96T
25 ng/L-800 ng/L
使用目的：
本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中腫瘤壞死因子α（TNF-α）含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠腫瘤壞死因子α（ TNF-α）。用純化的小鼠腫瘤壞死因子α（TNF-α）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入腫瘤壞死因子α（TNF-α），再與 HRP 標記的腫瘤壞死因子α（TNF-α）抗體合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP  酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的腫瘤壞死因子α（TNF-α）呈正相關。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中小鼠腫瘤壞死因子α（TNF-α）濃度。
試劑盒組成
30倍濃
20ml×1瓶
6ml×1瓶
12孔×8條
6ml×1瓶
6ml×1瓶
6ml×1/瓶
終止液
6ml×1瓶
2   酶標試劑
標準品（1600 ng/L）    0.5ml×1瓶
3   酶標包被板
4   樣品稀釋液
5   顯色劑 A液
6   顯色劑 B液
標準品稀釋液
1.5ml×1瓶
1份
10   說明書
11   封板膜
12   密封袋
2張
1個
標本要
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因   NaN3抑制辣根過（HRP）活性。
操作步驟
1.  標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
800 ng/L
400 ng/L
200 ng/L
100 ng/L
50 ng/L
5號標準品
4號標準品
3號標準品
2號標準品
1號標準品
150µl的原倍標準品加入  150µl標準品稀釋液
150µl的  5號標準品加入  150µl標準品稀釋液
150µl的  4號標準品加入  150µl標準品稀釋液
150µl的  3號標準品加入  150µl標準品稀釋液
150µl的  2號標準品加入  150µl標準品稀釋液
2.  加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。溫育用封板膜封板后

37℃溫育30分鐘。
30倍稀釋后備用
配液：將 30倍濃
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜重復 5次，拍干。30秒后棄去，如此
加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。
溫育：操作同 3。
洗滌：操作同 5。
顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液    50µl，終止反應（此時藍色立轉）。
11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止液后 15分鐘以內進行。
操作程序總：
計算以標準物的濃度為橫坐標， OD值為縱坐標，在坐標紙上，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與  OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

小鼠腫瘤壞死因子酶聯免疫分析試劑盒使用說明書注意事項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有析出，稀釋時可在浴中加溫助溶，洗滌時不影響。3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在 5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本  OD值大于標準品孔*孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
小鼠腫瘤壞死因子酶聯免疫分析試劑盒使用說明書保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月