牛副結核病是由甬0結核分枝桿菌引起的一種以反芻獸為主的慢性傳染病，又叫johne病。該方法的敏感性76％，特異性97％,通過對2483頭奶牛進行檢測，檢出率為6.1％，并與常規的補反和反常反應進行了比較。“前對該病尚無有效的治療辦法，*此病的*辦法是檢出、隔離或淘汰病畜，目前本病的檢疫主要依賴補反和反常反應。本文建立了牛副結核病ELISA試劑盒診斷方法。
一、材料與試劑
1、草分枝桿菌吸收抗原
2、副結核分枝桿菌親和層析抗原
3、牛副結核病參考陰性血清兔抗牛IgG酶標抗體
4、牛副結核病參考陽性血清
5、草分枝桿菌吸收抗原
1～5項均由單位供應。
6、器材 ELISA試劑盒板， 酶聯免疫吸附檢測儀、加樣器、洗瓶、恒溫箱等。
二、操作方法
1、抗原包被 以抗原稀釋液將副結核親和層析抗原稀釋至50µg/ml,每孔包被0.1ml.部分對照孔以牛血清白蛋白（50µg/ml）包被。
2、血清處理 取待檢血清、參考陽性血清、參考陰性血清各0.10ml，加生理鹽水0.80ml，加草分枝桿菌吸收抗原0.10ml，混勻，37℃感作1h.取0.10ml，加血清稀釋液0.90ml（注意血清稀釋液中加牛血清白蛋白，不加犢牛血清）。混勻即可
3、正式試驗 按表12－4進行。每個樣品加2孔，以求OD平均值。
三、結果判定
在對照組成立的前提下， 即參考陽性血清呈棕，參考陰性血清及其它對照孔呈無色或淺， 判定待測結果。
1、目測判定 與參考陽性血清孔顏色相當，即呈棕，判為ELISA陽性（＋）。
2、酶標儀判定（490nm） 以底物溶液對照孔調零，校正參考陽性血清OD值為1.0（或相應規定值），測定待檢孔。當OD≥0.50，判ELISA陽性（＋）；0.40≤OD≤0.49判ELISA試劑盒可凝（±）；OD<0.40，判ELISA試劑盒陰性（－）。