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FISH技術在白血病中的應用
最近更新時間：2011-4-2
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熒光原位雜交（Fluorescence In Situ Hybridization, 簡稱FISH）由于其直觀, 快速, 敏感性高和方便靈活越來越得到廣泛應用, 尤其是在血液學領域中. 因為白血病標本比較容易取得和制備, 不同類型的白血病又往往有其特異的染色體異常, FISH在白血病診斷, 治療監測, 預后估計和微小殘留病檢測等諸方面都正成為*的重要手段.
FIHS技術本身也在新的需求下不斷更新和完善.FISH的基本原理很簡單, 就是標記了熒光的單鏈DNA（探針）和與其互補的DNA（玻片上的標本）退火雜交, 通過觀察熒光信號在染色體上的位置來反映相應基因的情況.
FISH探針按標記方法可分為直接標記和間接標記: 用生物素（biotin）或地高辛（digoxingenin）標記稱為間接標記, 雜交后需要通過免疫熒光抗體檢測方能看到熒光信號, 因而 步驟較多, 操作麻煩, 其優點是在信號較弱或較小時可經抗原抗體反應擴大; 直接用熒光素標記DNA的方法稱為直接標記. 由于直接標記的探針雜交后可馬上觀察到熒光信號, 省去了煩瑣的免疫熒光反應, 不再需要購買熒光抗 體, 也由于近年來熒光互的亮度和抗淬滅性的不斷改進和提高, 直接標記的熒光探針越來越成為, 如Vysis公司 的FISH探針均采用直接熒光標記, 并采用多種不同顏色的熒光, 方便在同一標本上同時檢測多鐘異常. 其熒光強度 和信號大小都易于在普通熒光顯微鏡下觀察, 操作過程中也不需要嚴格避光, 使FISH過程變得簡便而易于操作. FISH并不能取代傳統的白血病MCI診斷, 但它卻能使MIC分型更為準確和深入. 我們知道, MIC即細胞形態 學（M）, 免疫學（I）和細胞遺傳學（C）, 三者結合對白血病進行分型診斷, 對不同類型的白血病采用不同治療方案手段. 隨著人們對白血病的不斷認識, 僅進行MIC分型已不夠全面, 還要加上對白血病的分子（M）診斷, 成為MICM分型. FISH就是連接細胞遺傳學和分子生物學的橋梁.
白血病檢測中常用的FISH探針有單一序列探針, 著絲粒探針, 整條染色體探針, 常用方法有單標記FISH, 雙 標記FISH, 比較基因組雜交（CGH）, M-FISH 和Rx-FISH等. 各種FISH探針及方法均在白血病的診斷, 治療監測, 預后估計和微小殘留病檢測中起重要作用:
1. 白血病診斷.
白血病的細胞遺傳學研究已經發現了許多白血病特異的染色體易位, 為疾病的診斷和特異治療提供了依據. 目前, 大部分易位累及的白血病相關基因已經被克隆, 可通過檢測些融合基因對白血病進行分子診斷. 常見的單一序列探 針有PML-RAR?[t（15;17）, 見于M3, AML1-ETO[t（8;21）, 見于M2b], BCR-ABL[t（9;22）, 見于CML和ALL], - AML1[t（12;21）, 見于兒童前B-ALL]等等, 為方便起見, 商品化的探針多為標記的, 即兩個基因分別用兩種顏色標記, 同時在一張玻片標本上雜交. 用FISH進行融合基因檢測比常規的染色體核型分析要準確, 其敏感性雖略低于RT- PCR方法, 但其假陽性和假陰性率卻大大低于PCR法. 若核型分析, RT-PCR, FISH三者結合則可大大提高白血病診 斷的準確性.
常規細胞遺傳學分析常有一些染色體易位不易發現或有不明來源的標志染色體或有復雜的染色體易位不易診 斷. FISH則可解決這些難題. 白血病的染色體異常分為染色體數目異常和結構異常. 對數目異常, 可采用染色體著 絲粒探針或整條染色體探針[又稱為染色體涂色（Chromosome painting, CP）探針]. 如慢性粒細胞性白血病急變時常常 出現8號染色體三體. 此時8號著絲粒探針或CP探針就很容易診斷了. 目前, 幾乎所有染色體均已有了商品化的著 絲粒和CP探針. CP探針也適用于標志染色體和不易發現或復雜的染色體易位的檢測, t（12;21）的發現就是的例子. 染色體涂色往往要在核型分析的基礎上, 選擇可能發生異常染色體探針做雜交, 如果三條以上染色體發生復雜的交互 易位, 需要多次雜交分析才能確定.