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酶標(biāo)儀的校準(zhǔn)
從上述所獲的酶標(biāo)儀性能的有關(guān)信息資料,基本上可以說是間接的,有了目標(biāo)以后,如果還想獲得對某一酶標(biāo)儀的感性認(rèn)識,可以對其進(jìn)行自檢,主要有下述幾個(gè)方面。
1.外觀
酶標(biāo)儀上應(yīng)有儀器名稱,型號,編號,生產(chǎn)廠家,出廠日期和電源電壓;各調(diào)節(jié)旋鈕,按鍵和開關(guān)均能正常工作,外表面無明顯機(jī)械損傷;顯示文字應(yīng)清楚完整。
2.酶標(biāo)儀的穩(wěn)定性(漂移)
選用492nm波長,在吸光度0.0A處,測定標(biāo)稱值為1.0A的光譜中性濾光片(測定操作按儀器說明進(jìn)行),記錄儀器示值或均值,10min后再次記錄儀器示值或均值,前后兩次測定值之差不應(yīng)超過±0.00。
3.吸光度測定的準(zhǔn)確度
選用405,492和620nm波長,以空氣為參比,分別測定標(biāo)稱值為0.5和1.0A的光譜中性玻璃濾光片,用測試板代替酶標(biāo)板,按儀器說明連續(xù)測定3次,按下式計(jì)算準(zhǔn)確度:AA=1/3(A、+A。+A3)—A:(A:為標(biāo)準(zhǔn)值)。
4.吸光度測定的重復(fù)性
波長選擇同(3),在酶標(biāo)板*排加注空白溶液,第二排加入濃度為200rig/mL的重鉻酸鉀溶液,重復(fù)測定5次。記錄每次測定的第二排吸光度值,取第二排任一孔吸光度值與各次對應(yīng)孔吸光度值。
5.酶標(biāo)儀的線性
選用540nm波長,將標(biāo)稱值0.5,1.0A中性濾光片分別放入測試板樣本位置中,以空氣為參比,各重復(fù)測定3次;然后將以上兩片中性濾光片疊加后置于測試板的同一孔位中,重復(fù)測定3次。
線性誤差:
式中A1為*片中性濾光片吸光度均值,A:為第二片中性濾光片吸光度均值,A1,2為兩片中性濾光片疊加后的吸光度均值。
6.測定速度的檢定
選用492nm波長,放人96孔酶標(biāo)板進(jìn)行測定,用秒表計(jì)測儀器打印出全部數(shù)據(jù)的時(shí)間。
酶標(biāo)儀除了在選購時(shí),應(yīng)盡可能自檢外,在使用中也應(yīng)定期檢定,以保證酶標(biāo)儀測定的有效性。