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JM109,DH,BL21感受態有何區別

時間:2013-5-9閱讀:1110
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1:DH菌株
DH是一種常用于質??寺〉木?。E.coli DH在使用pUC系列質粒載體轉化時,可與載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現α-互補??捎糜谒{白斑篩選鑒別重組菌株。

基因型:F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA1

2:BL21(DE3) 菌株

該菌株用于表達克隆于含有噬菌體T7啟動子的表達載體(如pET系列)的基因。T7噬菌體RNA聚合酶位于λ 噬菌體DE3區,該區整合于BL21的染色體上。該菌適合表達非毒性蛋白。

基因型:F-,ompT, hsdS(rBB-mB-),gal, dcm(DE3)

3:BL21(DE3) pLysS菌株

該菌株含有質粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表達T7溶菌酶的基因,能夠降低目的基因的背景表達水平,但不干擾目的蛋白的表達。該菌適合表達毒性蛋白和非毒性蛋白。

基因型:F-,ompT hsdS(rBB-mB-),gal, dcm(DE3,pLysS ,Camr

4:JM109菌株

該菌株在使用pUC系列質粒載體進行DNA轉化或用M13 phage載體進行轉染時,由于載體DNA產生的LacZa多肽和JM09編碼的LacZΔM15進行α-互補,從而顯示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鑒別重組體菌株

基因型:recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,supE44,relA1,Δ(lac-proAB)/F’[traD36,proAB+,lacIq,lacZΔM15]

5:*0菌株

該菌株適用于的DNA克隆和質粒擴增,能保證高拷貝質粒的穩定遺傳。

基因型:F- ,mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC), φ80 ,lacZΔM15,△lacⅩ74, recA1 ,araΔ139Δ(ara-leu)7697, galU ,galK ,rps, (Strr) endA1, nupG

6:HB101菌株

該菌株遺傳性能穩定,使用方便,適用于各種基因重組實驗

基因型:supE44,hsdS20(rB-mB-),recA13,ara-14,proA2,lacY1,galK2,rpsL20,xyl-5,mtl-1,leuB6,thi-1
 

M110或 SCS110

大多數大腸桿菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶,前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基,后者在CCA/TGC序列的*個胞嘧啶 C-5位置上引入甲基。 常用的菌株都會產生dam,dcm,從而受到甲基化的影響.

部分限制性內切酶對甲基化的DNA不能切割,如FbaI和MboI等,一般生物公司提供的內切酶說明中均有說明。

大多數酶切位點的甲基化不影響切割,而有些會影響,如XbaI, BclI等。而且甲基化只發生在特定序列,以XbaI為例,只有在位點序列旁出現GA或TC,該XbaI位才會被甲基化。

而要解除這種限制修飾作用通常有兩種方法:
(1)選用上述酶的同功酶,如Sau3AI,DNA識別切割位點與MboI相同;但不受甲基化影響;

(2)利用甲基化酶缺失的受體細胞進行DNA的制備,如E.coli JM110和鏈霉菌等,前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出,而后者細胞內本就沒有甲基化酶,從這些細胞中抽提的 DNA就能被上述酶切割。

E.coli JM110
要排除dam,dcm甲基化的影響,需要用特定的dam-,dcm-的菌株,如JM110

如果由JM110或 SCS110等甲基化缺失的菌株產生的質粒,則不會被甲基化.

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