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技術(shù)文章

小鼠腫瘤壞死因子βELISA試劑盒原理及操作步驟

閱讀:1778          發(fā)布時間:2011-6-27

                          小鼠腫瘤壞死因子βELISA試劑盒原理及操作步驟


小鼠腫瘤壞死因子βELISA試劑盒試驗原理:
        TNF-β試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知TNF-β濃度的標準品、未知濃度的樣品 加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將TNF-β和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中TNF-β的濃度呈比例關(guān)系。
小鼠腫瘤壞死因子βELISA試劑盒操作步驟:

1.   使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
2.   根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3.   加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。
4.   甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
5.   每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6.   甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
7.   每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育5分鐘。避免光照。
8.   取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9.   在450nm波長處測定各孔的OD值。
上海恒遠生物公司主要供應(yīng)ELISA試劑盒、生物試劑、血清、抗體、標準品、培養(yǎng)基等生物科研試劑,所有產(chǎn)品充分驗證,質(zhì)量可佳,價格實惠,值得信賴,更多產(chǎn)品信息歡迎您來電索取。

 

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