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ELISA 樣品制備指南
閱讀：1455 發布時間：2020-8-12Elisa生物試驗是一種敏感性高，特異性強，重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩定、易保存，操作簡便，結果判斷較客觀等因素，已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。ELISA檢測試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測。
在實驗中，樣品的制備也是非常重要的，操作不好可能會影響實驗結果，到底該怎么制備樣品呢？接下來小編就帶你看看ELISA樣品制備的方法吧！
1.細胞培養物上清液
①將培養基移至離心管， 4℃， 1,500 rpm 離心 10 分鐘；
②立即進行上清液的分裝（血清）并在 -80℃ 下保存樣品，盡可能減少反復凍融次數。
2.細胞提取物
①將組織培養板放置在冰上；
②吸出培養基并用預冷PBS 輕輕洗滌細胞一次；
③吸出 PBS ，加入100 mm 培養板加入0.5ml*提取緩沖液；
④收集細胞至在傾斜板中，然后移至經過預冷的離心管中；
⑤短暫渦旋后在冰上孵育 15-30 分鐘；
⑥在 4℃ 下13,000 x rpm 離心 10 分鐘，沉淀不溶性內容物；
⑦將上清液（這里是指可溶性細胞提取物）分裝至預冷的離心管中，并于 -80℃ 保存，盡可能減少反復凍融次數。
3.條件培養基
①將細胞接種到*（含血清）生長培養基中，使細胞增殖達到一定的融合率；
②棄去培養基，數毫升預熱PBS 小心洗滌，重復洗滌步驟；
③棄去PBS 洗滌液并小心加入無血清培養基；
④孵育 1-2 天；
⑤將培養基移至離心管， 4℃ 1,500 rpm 離心 10 分鐘；
⑥立即分裝上清液（血清）并在 -80℃ 下保存樣品，盡可能減少反復凍融次數。
4.乳汁
①收集樣品并在 4℃ 下以 10,000 x g 離心 2 分鐘；
②分裝上清液并在 -80℃ 下保存樣品，盡可能減少反復凍融次數。
5.血漿
①將全血收集到含抗凝劑的管中，例如 BD 抗凝真空采血管或添加 0.1M 檸檬酸鈉至 1/10 終體積；
②4℃ 3,000 rpm 離心 10 分鐘；
③立即分裝上清液（血漿）并在 -80℃ 下保存樣品，盡可能減少反復凍融次數。
6.尿液
①收集樣品并在 4℃ 下以 10,000 x g 離心 2 分鐘；
②等分上清液（血清）并在 -80℃ 下保存樣品，盡可能減少凍融循環次數。
7.唾液
①收集樣品并在 4℃ 下以 10,000 x g 離心 2 分鐘；
②立即分裝上清液（血漿）并在 -80℃ 下保存樣品，盡可能減少反復凍融次數。
8.血清
①將全血收集到未經處理的測試管中，或者到不含抗凝劑的管中，如 BD 血清用真空采血管；
②在室溫下連續孵育 20 分鐘；
③4℃ 3,000 rpm 離心 10 分鐘；
④立即分裝上清液（血漿）并在 -80℃ 下保存樣品，盡可能減少反復凍融次數。
9.組織提取物
①用干凈的工具解剖組織，best好在冰上、盡快進行，以防止被蛋白酶降解；
②將組織置于圓底的微量離心管中，并浸入液氮中進行“速凍”，將樣品保存在 -80℃ 下以便后續使用或放置在冰上進行直接勻漿；
③對于約 5 mg 的組織片，可向管中添加約 300 μl *提取緩沖液（查看細胞/組織提取緩沖液配方），然后用電動勻漿器勻漿；
④清洗刀片兩次，每次清洗使用 300μl *提取緩沖液，然后在 4℃ 下維持恒定攪拌 2 小時（例如置于冷室中的回旋振蕩器上）；
⑤4℃ 13,000 x rpm 離心 20 分鐘。置于冰上，將上清液（這里是指可溶的蛋白質提取物）分裝至新、預冷的管中并在 -80℃ 下保存樣品。盡可能減少反復凍融次數。
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