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細胞培養(yǎng)室的操作環(huán)境很重要
閱讀：758 發(fā)布時間：2021-2-24細胞培養(yǎng)室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環(huán)境清潔，空氣清新，干燥和無煙塵。細胞培養(yǎng)室的設計原則一般是無菌操作區(qū)設在室內(nèi)較少走動的內(nèi)側(cè)，常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室，而洗刷消毒在另一室。
一、常用設施及設備
1.超凈工作臺：也稱凈化工作臺，分為側(cè)流式，直流式和外流式三大類。
2.無菌操作間：一般由更衣間，緩沖間和操作間三部分組成。操作間放置凈化工作臺及二氧化碳培養(yǎng)箱，離心機，倒置顯微鏡等。緩沖間可放置電冰箱，冷藏器及消毒好的無菌物品等。
3.操作間：普通培養(yǎng)箱，離心機，水浴鍋，定時鐘，普通天平及日常分析處理物。
4.洗刷消毒間：烤箱，消毒鍋，蒸餾水處理器及酸缸等。
5.分析間：顯微鏡，計算機及打印機等。
二、培養(yǎng)器皿
用細胞培養(yǎng)器皿有培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)板，培養(yǎng)皿等。
常準備量是使用量的三倍，器皿應選擇透明度好，無毒，利于細胞粘附和生長的材料，常用一次性聚苯乙烯材料制品或中性硬度玻璃制品。
常用的器皿有下面幾種：
1.液體儲存瓶：用于儲存各種配制好的培養(yǎng)液，血清等液體，常用規(guī)格有500ml，250ml，100ml等幾種。
2.培養(yǎng)瓶：根據(jù)培養(yǎng)細胞種類要求不同培養(yǎng)瓶的形態(tài)各異，用于細胞傳代培養(yǎng)的細胞要求瓶壁厚簿均勻，便于細胞貼壁生長和觀察，瓶口要大小一致，口徑一般不小于1cm，允許吸管伸入瓶內(nèi)任何部位，規(guī)格有200ml,100ml,50ml,25ml,10ml等幾種。
3.培養(yǎng)皿：用于開放式培養(yǎng)及其它用途。分直徑30mm，60mm，120mm等幾種。
4.吸管：常用的有長吸管和短吸管兩類，長吸管也稱刻度吸管。其改良后管上部有球型刻度稱改良吸管，刻度吸管用于移動液體，常用1ml和10ml兩種。短吸管也叫滴管，分彎頭和直頭兩種。
5.離心管：離心管是細胞培養(yǎng)中使用廣泛的器皿，根據(jù)用途不同形態(tài)各樣，常用于細胞培養(yǎng)的離心管有大腹式尖底離心管和普通尖底離心管兩類。前者分別為50ml，30ml，15ml；后者則多為10ml和5ml。
6.其它：如三角燒瓶，燒杯，量筒，漏斗，注射器等。
三、細胞培養(yǎng)溫度
維持培養(yǎng)細胞旺盛生長，必須有恒定而適宜的溫度。不同種類的細胞對培養(yǎng)溫度要求也不同，人體細胞培養(yǎng)的標準溫度為36.5℃±0.5℃，偏離這一溫度范圍，細胞的正常代謝會受到影響，甚至死亡。
培養(yǎng)細胞對低溫的耐受力較對高溫強，溫度上升不超過39℃時，細胞代謝與溫度成正比；人體細胞在39-40℃1小時，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復；在40-41℃1小時，細胞會普遍受到損傷，僅小半數(shù)有可能恢復；41-42℃1小時，細胞受到嚴重損傷，大部分細胞死亡，個別細胞仍有恢復可能；當溫度在43℃以上1小時，細胞全部死亡。相反，溫度不低于0℃時，對細胞代謝雖有影響，但并無傷害作用；把細胞放入25-35℃時，細胞仍能生存和生長，但速度減慢；放在4℃數(shù)小時后，再回到37℃培養(yǎng)，細胞仍能繼續(xù)生長。細胞代謝隨溫度降低而減慢，當溫度降至冰點以下時，細胞可因胞質(zhì)結(jié)冰受損而死亡。但是，如果向培養(yǎng)液中加入一定量的冷凍保護劑（二甲亞砜或甘油），可在深低溫下如-80℃或-196℃（液氮）長期保存。
四、合適的氣體環(huán)境
氣體是哺乳動物細胞培養(yǎng)生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環(huán)，產(chǎn)生供給細胞生長增殖的能量和合成細胞生長所需用的各種成分。開放培養(yǎng)時一般把細胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中，二氧化碳既是細胞代謝產(chǎn)物，也是細胞生長繁殖所需成分，它在細胞培養(yǎng)中的主要作用在于維持培養(yǎng)基的pH值。大多數(shù)細胞的適宜pH為7.2-7.4，偏離這一范圍對細胞培養(yǎng)將產(chǎn)生有害的影響。但細胞耐酸性比耐堿性大一些，在偏酸環(huán)境中更利于細胞生長。但有一些細胞也喜歡偏堿環(huán)境中生長，如成纖維細胞適合pH是7.4-7.6.每種細胞都有其適pH值。
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