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如何減少ELISA實(shí)驗(yàn)誤差,我有妙招！
閱讀：1041 發(fā)布時(shí)間：2021-2-25細(xì)節(jié)決定成敗，在ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作中，誤差分有系統(tǒng)誤差、偶然誤差、過失誤差，而一個(gè)小小的誤差主意能夠影響到實(shí)驗(yàn)，很多人往往因?yàn)橐粋€(gè)小細(xì)節(jié)，一個(gè)誤差沒能讓實(shí)驗(yàn)成功。那么實(shí)驗(yàn)誤差概率如何縮小？今天上海恒遠(yuǎn)生物公司教您一些妙招優(yōu)化ELISA，減少誤差：
①：檢驗(yàn)技師應(yīng)具備從事實(shí)驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。能熟練操作實(shí)驗(yàn)儀器、器械，具有一定總結(jié)和分析問題的能力，對(duì)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的意外情況能及時(shí)妥善解決。
②：使用校對(duì)過的微量移液器，排除自然誤差。移液器準(zhǔn)確與否對(duì)定量檢測尤為重要。
③：仔細(xì)閱讀說明書，嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行規(guī)范化操作。不同批號(hào)的試劑不可混用。值得改進(jìn)的地方，反復(fù)試驗(yàn)確定成立后才能改進(jìn)。
④：洗滌*，如若洗板不*，酶結(jié)合物本底顯色會(huì)呈現(xiàn)假陽性。洗滌液要新鮮，現(xiàn)用現(xiàn)配，陳舊的洗滌液會(huì)出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象，也可能出現(xiàn)假陽性。
⑤：嚴(yán)控反應(yīng)時(shí)間，反應(yīng)時(shí)間過長，酶失活；反應(yīng)時(shí)間過短，酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合，物結(jié)構(gòu)松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假陰性。
⑥：注意試劑盒保存期，過保存期的試劑不能使用。
⑦：評(píng)估試劑的實(shí)用性，試劑的穩(wěn)定與否，對(duì)準(zhǔn)確率的高低到頭重要。在試劑啟用前，應(yīng)進(jìn)行陰、陽對(duì)照及樣品反復(fù)比照試驗(yàn)，判定試劑符合要求后方可使用。
⑧：嚴(yán)格掌握顯色時(shí)間，顯色時(shí)間過短，加入終止液反應(yīng)終止后，底物結(jié)合物的量過少，易出現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時(shí)間后顯色，應(yīng)判為假陽性，這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后立即顯色，不可報(bào)陽性，這可能是本底顯色的結(jié)果。
⑨：加樣要準(zhǔn)確、快速。如果加樣不準(zhǔn)確，酶物的量不能確定，直接影響顯色結(jié)果。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān)，所以加樣應(yīng)慎重。要求在一定時(shí)間內(nèi)加樣完畢的實(shí)驗(yàn)，如果加樣遲緩，便出現(xiàn)誤差，而且試劑長時(shí)間暴露在外，尤其室溫過高時(shí)，保存期會(huì)縮短甚至失效。
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