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酶免疫分析——技術進步與自動化
閱讀：771 發布時間：2021-10-12酶免疫分析（Enzyme Immunoassay,EIA）是標記免疫分析中的一項重要技術,是以酶標記的抗體（抗原）作為主要試劑，將抗原抗體反應的特異性和酶催化底物反應的高效性和專一性結合起來的一種免疫檢測技術。作為經典的三大標記技術之一,酶免疫技術在檢驗醫學中得到廣泛應用并不斷得到更新，不斷和其他先進技術如熒光、發光技術以及儀器自動化相融合，日臻完善,許多自動化儀器實際上是EIA技術和其他現代化技術的復合體，其分析敏感度已達到甚至大大超過放射免疫分析(Radioimmunoassay,RIA)的水平，因試劑穩定無放射性污染且分析形式日趨多樣化，簡易靈活，臨床應用廣泛而倍受重視。
一、酶免疫分析的技術進步
近年來，EIA技術取得了顯著的發展，主要表現在以下方面：
1、 繼單克隆抗體后的第三代抗體基因工程抗體的應用，明顯地提高了檢測的特異性，基本消除了抗原、抗體間的非特異性交叉反應，保證了分析的準確性。抗體制備技術的進步，使試劑的生產制備得以規模化，檢測范圍日益擴展，小分子抗原、半抗原的檢測成為事實。
2、 分析方式的改進與多樣化提高了試驗的敏感性。
（1） 除早期的競爭法，間接法外，又發展了雙抗原夾心法測抗體，偶聯酶標記法測抗原，橋聯酶免疫分析，酶放大免疫分析技術等，后者應用了生物素-親和素系統，底物循環放大系統，酶-抗酶放大系統及酶偶聯放大系統等。
（2）由于酶標記技術的進步，標記酶的應用已從過氧化物酶，擴展到堿性磷酸酶，β半乳糖苷酶，尿素酶，葡萄糖6磷酸脫氫酶，葡萄糖氧化酶，蘋果酸脫氫酶，至今有二十多種酶被應用于EIA ，但應用最多的仍然是辣根過氧化物酶（Horseradish Peroxidase,HRP）和堿性磷酸酶（Alkalinephasphotase，ALP）。
（3） 酶免疫分析與其它標記免疫分析相結合如與熒光免疫分析（Fluorescence Immunoassay ,FIA）結合形成熒光酶免疫分析（Fluorescence Enzyme Immunoassay ，FEIA），酶促放大時間分辨熒光免疫分析（Enzyme-am-plified time-resolved fluoroimmunoassay ，EATRFIA），EIA與化學發光免疫分析（Chemiluminescence immunoassay，CLIA）結合形成酶—化學發光免疫分析，增強化學發光酶免疫分析（ECLEIA）。EIA與聚合酶鏈反應結合形成的PCR-EIA分析等。
（4）改進固相載體的技術
傳統ELISA應用的固相載體是聚苯乙稀微孔板，聚苯乙烯珠或條，后發展為硝酸纖維素膜、活化濾紙、硅片、尼龍、利用高分子材料合成的各種固相微粒等。為提高固相表面的結合容量，增加結合物的范圍而改造聚苯乙烯的表面，如用化學偶聯法導入功能性醛基、酰基、烷胺基等以更好地與蛋白質，多肽的羧基結合，用位點導向性共價偶聯法引入親和素，蛋白A，多聚賴氨酸等，以牢固地捕獲蛋白或多肽，超平整聚苯乙烯表面的制備，克服了表面粗糙帶來的不均一性，達到平均粗糙度只有2A+的超平整平面，實現了對蛋白的結合容量大，脫附率低，孔間均一性好，使試驗精密度達5%。
應用于雙抗體夾心法時，聚苯乙烯經射線照射后，可以增加其吸附性能特別是對免疫球蛋白的吸附性能。近年美國Corning公司研制成功表面經琥珀酰亞胺酯活化酶標板，其質量達到氨基活化相似水平。
（5）分析方法的創新 如同步ELISA法測定多種抗體是將抗原包被在與微孔相匹配的釘板的釘子上，蓋上釘板的同時與微孔內的所需標本、試劑反應，是又一種改良ELISA。利用抗體和抗抗體能形成多層復合物的特性，將常規二步溫育法改為一步溫育測定法，使檢測時間大為縮短，現在已廣為應用。