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ELISA試劑盒做實(shí)驗(yàn)稀釋血清的步驟有哪些
閱讀:1402 發(fā)布時(shí)間:2014-7-15在實(shí)驗(yàn)的過程中,好多客戶會(huì)遇到很多不一樣的問題,比如剛開始接手做實(shí)驗(yàn)的老師他們就不知道什么樣的ELISA試劑盒好,該選擇什么樣的ELISA試劑盒來做實(shí)驗(yàn),還有做實(shí)驗(yàn)可以稀釋血清嗎??等等,下面就讓上海恒遠(yuǎn)吳向我們介紹,為什么ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)要稀釋血清,稀釋血清的原因又有哪些?
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)稀釋血清的步驟:
先把蛋白稀釋一定的倍數(shù),比如說10倍、20倍稀釋(這樣可以大體確定一個(gè)參數(shù)),將抗原進(jìn)行一系列稀釋包被微量反應(yīng)板,再用一定稀釋度的陽性參考血清和陰性參考血清進(jìn)行孵育后洗滌,再加酶結(jié)合物進(jìn)行反應(yīng),經(jīng)孵育洗滌后,加底物溶液顯色,終止反應(yīng)后分別測(cè)定O.D值,選擇O.D值≥1.0的那個(gè)抗原稀釋度為zui適包被濃度。一般總是要選擇那個(gè)O.D值稍大于1.0,而不選擇小于1.0的抗原濃度。陰性參考血清O.D值要求<0.1-0.2。也就是要求陽性參考血清和陰性參考血清的O.D值有明顯差別。
在ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)血清為什么要稀釋?有兩個(gè)原因:
1)競(jìng)爭(zhēng)抑制比較明顯,應(yīng)稀釋競(jìng)爭(zhēng)物;
2)血清中含有的性腺激素比較低,應(yīng)該濃縮才對(duì)。