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技術文章

ELISA試劑盒檢測的影響因素有哪些

閱讀:1141          發布時間:2015-8-3

 ELISA方法被廣泛用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術要求,在臨床檢驗中如果處理不當,會出現一些錯誤結果(即假陽性或假陰性結果)。引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有:(1)標本因素;(2)操作因素;(3)試劑因素;本文主要就操作因素對ELISA測定的影響做如下討論:

操作因素

1、溫育的影響

溫育是影響ELISA測定結果的關鍵因素。溫育時間不夠,弱陽性標本檢測不出;溫育溫度不夠,弱陽性標本也難以檢出。

2、洗板的影響 

洗板對ELISA測定來說也是關鍵步驟。洗板分手工洗板和機器洗板,一般認為機器洗板較手工洗板效果要好,關鍵是洗板次數的選擇。洗板次數較少,造成殘留,可引起假陽性結果;洗板次數過多,可造成抗原抗體結合物洗脫,造成假陰性結果。

3、 顯色的影響 

影響顯色的關鍵是顯色溫度和顯色時間,有些實驗室操作人員不嚴格按說明書操作,因為擔心“花板",往往是顯色時間不到就匆忙終止顯色,結果造成弱陽性標本不能顯色而導致假陰性發生。

4、加樣的影響 

加入樣品、試劑及混勻時間的差異稱為操作時差。操作時差在每個試驗中都存在,尤為手工操作更著,對結果都會產生或大或小的影響。ELISA常用項目,例如:乙肝兩對半,多是成批檢測。從加*個樣本到zui后一個樣本,包括中間換吸管尖的工作,在這一過程中有一個時間差;加試劑及混勻也同樣存在時間差,這種操作時間差會致使抗原抗體反應和酶促反應時間的不一致,而這種不一致可以直接導致誤差的產生,尤其是在夏天,若不合理安排時間、盡量減少時差,將會導致假陽性或假陰性的結果出現。

ELISA檢測法影響因素眾多,上述只是一些常見因素分析。要想提高ELISA檢測的檢測質量,關鍵還要加強實驗室科學管理,強化標準化流程操作,加強質量控制,提高人員素質,以減少檢測假陽性、假陰性結果的發生。

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