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標準曲線圖該怎樣選擇方程去擬合
閱讀:2490 發(fā)布時間:2015-8-19ELISA 試劑盒標準曲線的繪制選擇什么方程去擬合?做校準曲線時,曲線擬合類型是選擇線性還是二次方程(曲線),二者哪一個更?這兩個問題幾乎是剛開始接觸所有做ELISA實驗的新手必問的問題。因為標準曲線做的好與壞會直接影響到實驗的結果,甚至是關系到實驗的成敗。恒遠技術為您總結以下要點:
在S曲線的低濃度部門可以用乘冪方程很好的擬合,中低濃度部門可以用直線方程,中間部門可用對數(shù)方程,而中后段可用四參數(shù)。免疫檢測時尺度點(可以是倍比稀釋的,也可以不是)濃度假如和相應的吸光度(OD)值假如能夠呈現(xiàn)直線關系當然是的了,這時可以通過EXELL等利便的獲得擬合曲線,進而推算出樣品的濃度值。
關于尺度曲線的擬合方式,直線、二次曲線、三次曲線、指數(shù)、對數(shù)等雖都可用于ELISA及其它生物學反應中的曲線擬合,但都只合用于曲線的一部門,有的合用于前半段,有的合用于后半段,有的合用于中間一段,而Logistic曲線則對曲線的全部都有較好的合用性。在一個長的區(qū)間內,Logistic應該都能擬合得較為理想。假如用來定量,S形曲線的中間段(較陡處)是比較好的,而兩真?zhèn)€平坦部門計算誤差會大,有時甚至會很大。用于免疫檢測的所謂“尺度曲線"實在稱為擬合曲線比較合適。目前上zui流行的免疫檢測擬合方式是“四參數(shù)邏輯擬合",用這種擬合方式往往能夠比較的反映濃度和吸光度的曲線關系,從而進一步比較準確的獲得樣品中待測物質的濃度值。但我們做免疫檢測很少有時候能夠有這么理想的情況,標品濃度和相應OD值往往是"S"型的曲線關系,這時就不能用直線擬合的方式了,而對擬合方法進行選擇就是必要的了。樞紐在于你的尺度曲線做到了S形的哪一部門,你想檢測的樣品濃度在曲線的哪一部門。人ELISA試劑盒當然,假如用于定量,仍是在中間一段較好。但建模型是一回事,而用它來定量是另一回事。這些方法固然沒有一種方法可以通用,但也都可以用。但并不是說它就是的。事實上不僅是ELISA,其它良多生物學反應都是S形曲線,也都可以用Logistic曲線擬合。