化工儀器網
技術文章
ELISA結果造成假陽性的原因何在
閱讀：4875 發布時間：2015-8-27上海恒遠生物科技有限公司技術明確表明ELISA實驗樣本要求： 血清標本宜在新鮮時檢測，嚴重溶血標本禁用。一般說來，在5天內測定的血清標本可放置于4℃，標本在冰箱中保存時間過長導致血清IgG 聚合。超過一周測定的需－20℃保存。凍結血清融解后，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混勻并避免產生氣泡。混濁或有沉淀的血清標本應先離心或過濾，澄清后再檢測。反復凍融會使抗體效價跌落，所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存；使用一次性玻璃試管或真空管采血管；并使用非抗凝標本，肝素抗凝血漿會增加OD值，可能與高濃度肝素具有強大的負電荷能吸附酶標記物不易洗脫有關；EDTA、酶抑制劑（如NaN3）可抑制ELISA系統中辣根過氧化物酶活性；血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標本采集時用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當的促凝劑。
關于ELISA結果造成假陽性的原因我司技術做出如下原因分析：
1.樣本嚴重溶血 ，以HRP為標記的ELISA測定中，殘留在孔內的血紅蛋白具有過氧化物酶樣活性，催化底物顯色造成假陽性。
2. 混有紅細胞的血清沉淀或附著在聚乙烯孔內不易洗凈；如有細菌污染 ，菌體中可能含有內源性HRP，也會產生假陽性反應；
3. 標本凝固不全 ，有時為了爭取時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結果；
4. 采血試管洗滌不* 、反復使用易交叉污染； 塑料試管能吸附抗原物質 ，樣本久置在塑料管內會使樣本內抗原含量下降造成假陰性。