化工儀器網
技術文章
影響ELISA結果準確性的外在因素
閱讀：1518 發布時間：2016-3-14 目前，ELISA方法已被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。在臨床檢驗及科研實驗中除正常反應外，有時常可見到一些錯誤結果。雖然ELISA測定中影響因素較多，其中包括在操作中有一定的技術要求，除此之外，外在因素更是影響甚大。本周一，我司技術部劉老師為廣大科研新手詳細整理了影響ELISA結果正確性的外在因素。
影響ELISA結果正確性的外在因素主要有：標本的采集、貯存等不當所致。如標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存過久、標本凝集不全和采血管中添加物等影響。
（1）標本溶血：由于各種人為原因引起的標本溶血，均可因紅細胞破壞溶解時釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過氧化物酶為標記的ELISA測定中，會導致非特異性顯色，干擾測定結果。為克服上述干擾作用，標本采集時必須注意避免溶血。
（2）標本受細菌污染：因菌體中可能含有內源性辣根過氧化物酶，因此，被細菌污染的標本同溶血標本一樣，亦可產生非特異性顯色而干擾測定結果。
（3）標本保存不當：在冰箱中保存過久的標本，血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體，在間接法ELISA測定中會導致本底過深、甚至造成假陽性；標本放置時間過長（如一天以上），有時抗原或抗體免疫活性減弱，亦可出現假陰性。為克服上述干擾，ELISA測定的血清標本宜為新鮮采集；如不能立即測定，5天內測定的血清標本可存放于4℃，1周后測定的血清標本應低溫凍存；凍存后融解的標本，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混合后再測定，但混勻時應輕柔，不可強烈振蕩。
（4）標本凝集不全：在沒有促凝劑和抗凝劑存在的情況下，正常血液采集后1/2~2h開始凝固，18~24h*凝固。臨床檢驗工作中，有時為了爭取時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清，此時的血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結果；這類情況于次日復查時因血凝已*，血清中不再有纖維蛋白原存在，故復查結果變為陰性。為避免上述干擾作用，解決的辦法是血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標本采集時用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當的促凝劑。
（5）標本管中添加物質的影響：抗凝劑（如肝素，EDTA）、酶抑制劑（如NaN3可抑制ELISA系統中辣根過氧化物酶活性）及快速分離血清的分離膠等均對ELISA測定有一定干擾作用。 綜上所述，對臨床檢驗ELISA測定中出現的假陽性或假陰性結果，在考慮試劑因素和操作因素之外，更多的應從標本因素方面進行分析，并應采取相應措施排除干擾作用。