邱模昌，蔡靈卿，王 芳，劉建明，程暢河

（江西醫學高等專科學校藥學系，江西  上饒３３４０００）

摘要：目的     研究β－胡蘿卜素（β－Ｃ）對高糖誘導的內皮細胞損傷的保護作用，并初步探討其作用機制。方法     在血管內皮細胞長至８０％ 以上融合時，將其分為５組：正常對照組、高糖損傷組及低、中和高劑量β－Ｃ 組，每組６ 個復孔。正常對照組加入１０％ 葡萄糖注射液５．５ ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ，高糖損傷組加入１０％ 葡萄糖注射液３３ ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ，低、

中和高劑量β－Ｃ 組分別加入β－Ｃ１０、２０、４０μｍｏｌ·Ｌ－１ ＋１０％ 葡萄糖注射液３３ ｍｍｏｌ·Ｌ－１ 。各組放置５％ＣＯ２ 培養箱中培養４８ｈ后，收集細胞或培養液進行實驗。使用酶聯免疫檢測儀、采用  ＭＴＴ 比色法檢測５ 組血管內皮細

胞存活率，采用流式細胞儀檢測血管內皮細胞凋亡率、血管內皮細胞中活性氧（ＲＯＳ）水平，使用全自動生化儀、采用乳酸→丙酮酸連續監測法檢測５組血管內皮細胞培養液中乳酸脫氫酶（ＬＤＨ）活性，使用全自動生化儀、采用硫代巴比妥酸比色定量法檢測５組血管內皮細胞培養液中丙二醛（ＭＤＡ）的水平；先參照   ＮＯ 檢測試劑盒的使用說明書進行實驗，后采用酶聯免疫檢測儀檢測５組血管內皮細胞培養液中 ＮＯ 水平。結果 與正常對照組比較，高糖損傷組的血管內皮細胞存活率、血管內皮細胞培養液中 ＮＯ 水平均明顯降低，血管內皮細胞培養液中 ＬＤＨ 活性、

ＭＤＡ 水平，血管內皮細胞凋亡率、血管內皮細胞中 ＲＯＳ水平均明顯升高（均 Ｐ＜０．０１）；與高糖損傷組比較，中、高劑量β－Ｃ 組的血管內皮細胞存活率、血管內皮細胞培養液中 ＮＯ 水平均明顯升高，血管內皮細胞培養液中 ＬＤＨ 活性、ＭＤＡ 水平及低、中和高劑量β－Ｃ 組的血管內皮細胞凋亡率、血管內皮細胞中 ＲＯＳ水平均明顯降低（Ｐ＜０．０５或

Ｐ＜０．０１）。結論    β－胡蘿卜素對高糖誘導的臍靜脈內皮細胞的損傷具有保護作用，其機制可能與增加 ＮＯ 水平和

促進 ＲＯＳ的降解有關。

關鍵詞：糖尿病；β－胡蘿卜素；高糖；血管內皮細胞損傷；活性氧；臍靜脈；保護作用

中圖分類號：Ｒ９６；Ｒ５８７．１      文獻標志碼：Ａ       文章編號：２０９５－４７２７（２０１４）０７－００２４－０５

β－胡蘿卜素（β－ｃａｒｏｔｅｎｅ，β－Ｃ）是常見類胡蘿卜素之一，類胡蘿卜素呈現很強的抗氧化性，具有清除

自由基、保護血管、抗腫瘤、護膚、增強免疫功能及保護神經系統等作用。有研究［７］發現，β－Ｃ 能充分提

高 ＮＯ 的水平和生物利用度，舒張血管，保護血管，

同時β－Ｃ 還能抑制 ＲＯＳ水平的升高，保持機體抗氧化能力和不斷產生的氧自由基的氧化能力之間的動態平衡，預防動脈粥樣硬化等的發生，但β－Ｃ 對高糖

誘導的血管內皮細胞損傷的保護效應目前研究較

少。本研究觀察了β－Ｃ 對血管內皮細胞損傷的保護效應，并從 ＲＯＳ與 ＮＯ 途徑探討β－Ｃ 對血管內皮細胞損傷的保護效應機制。

１ 材料與方法

１．１  實驗材料

人臍靜脈內皮細胞株 ＨＵＶＥＣ－１９ 購自中南大學（源自 ＡＴＣＣ 細胞庫），ＤＭＥＭ 培養基（上海恒遠生物科技有限公司），ＭＴＴ 溶液、Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ、

ＬＤＭＳＯ、乳 酸 脫 氫 酶 （ＬＤＨ ）試 劑 盒 和 丙 二 醛

（ＭＤＡ）試劑盒（海門市碧云天生物技術研究所），

沙長錦應用技術研究所），６５２ 酶聯免疫檢測儀（美國ＢＩＯ－ＲＡＤ 公司），ＤＸＣ６００全自動生化分析儀（美國 Ｂｅｃｋｍａｎ 公司），ＦＡＣＳＣ－ＡＬＩＢＵＲ 流式細胞儀

（美國ＢＤ 公司）。

１．２  實驗方法

１．２．１  血管內皮細胞培養與實驗分組、加藥方法

１）將人臍靜脈內皮細胞株 ＨＵＶＥＣ－１９ 傳代至第３代后用２０％ＤＭＥＭ（含１０％ 胎牛血清）懸浮細胞，計數后以５×１０３／孔的細胞數接種于六孔板培養板中，待 細胞長至 ８０％ 以上融合時進行實驗。

２）在血管內皮細胞長至８０％ 以上融合時，將其分為

５組：正常對照組、高糖損傷組及低、中和高劑量β－Ｃ 組，每組６個復孔。正常對照組加入１０％ 葡萄糖注射液５．５ ｍｍｏｌ·Ｌ－１，高糖損傷組加入１０％ 葡萄糖注射液３３ ｍｍｏｌ·Ｌ－１，低、中和高劑量β－Ｃ 組分別加入β－Ｃ１０、２０、４０μｍｏｌ·Ｌ－１＋１０％葡萄糖注射液３３ ｍｍｏｌ·Ｌ－１。各組放置５％ＣＯ２  培養箱中培養４８ｈ后，收集細胞或培養液進行實驗。３）將傳代至第３代的血管內皮細胞分為５組：正常對照組、高糖損傷組及低、中和高劑量β－Ｃ 組。

１．２．２  血管內皮細胞存活率的檢測

將５ 組 （傳 代至第 ３ 代的血管內皮細胞）用２０％ＤＭＥＭ（含１０％胎牛血清）懸浮細胞后，以每孔１０３  的 細 胞 數 接 種 于 ９６ 孔 板 培 養 板 中，每 孔２００μＬ，每組接種６ 個復孔。待細胞貼壁后８ｈ 后加藥，正常 對照組、高 糖損傷組及低、中 和高劑量β－Ｃ組加藥同１．２．１ 段。加藥后，放置５％ＣＯ２ 培養箱中培養２４ｈ。培養２４ｈ后，每孔加入 ＭＴＴ 溶液（５ｇ·Ｌ－１ ）１５μＬ，再放置 ５％ＣＯ２  培養箱中培養４ｈ。培養４ｈ后，小心吸棄孔內培養上清液。

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