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石蠟包埋組織DNA提取的基本方法
從石蠟包埋組織中提取DNA的基本步驟，是在常規DNA提取方法的基礎上改良和演變而業。Goelz等（1985）zui先提出的石蠟包埋組織DNA提取技術，是用機械的方法破碎組織，切除多余的石蠟，進入含SDS和高濃度蛋白酶K（１mg/ml）的提取緩沖液加溫孵育，然后進行苯酚和氯仿抽提。 所得DNA雖不完整，但可被限制性內切酶切割，因而適于點雜交，印跡雜交等多種分了生物學實驗。Dubeau等（1986）在上述方法上作了改進。 首先通過組織切片和二甲苯和脫蠟，保證了組織的*破碎，使細胞與消化液充分接觸，使DNA釋放和蛋白去除更加*；其次通過兩步消化的方法，將不適于做分子雜交的降解的DNA小段去除，僅保留那些可螺旋化的完整的DNA分子，從而提DNA質量，適于做Sorthern印跡雜交分析。Moerkerk等（1990）對上述兩種方法進行了比較，發現兩種方法所提行DNA之點雜交結果一致，非螺旋化DNA亦不影響雜交分析。
Goelz氏DNA提取方法的主要步驟
.切除多余石錯，暴露組織
.將組織切碎（zui大徑<0.5mm），稱重；
3.溶于TE9提取液（組織<50mg/5ml.50－500mg/10ml）,高速混懸2－3min，于48℃放置24h
ＴＥ９提取液的制備
500mmol/L Tris
20mmol/L EDTA
10mmol/L NaCl
1％ SDS
500 μg/ml 蛋白酶Ｋ
pH8.0
4.再次混懸組織，加入蛋白酶Ｋ至終濃度１mg/ml，SDS至２％，孵育40h；
5.用等體積酚－氯仿溶液抽提３次；
6.2.5倍體積乙醇沉淀DNA
7.-70℃放置２－４h
8.9 000xg離心１h
9.沉淀物用70％乙醇洗１次
0.干燥，TE（pＨ7.2）溶解。
　　不同類型的基因分析所要求的DNA質量和數量不同。Southern 印跡雜交分析需要10－15μg大片段DNA（>20kb），因為雜交前要進行相誚的限制性內切酶消化和凝膠分離不同片段長度的DNA。故DNA提取要求高，小片段DNA存在會直接影響雜交信號。與之相反，多聚酶鏈反應（PCR）則可在相對粗制的小片段DNA存在會直接影響雜交信號。與之相反，多聚酶鏈反應（PCR）則可在相對粗制的小片段DNA樣本上進行，分析所需的DNA很少，0.5μg甚至更少即可。PCR的模板DNA制備方法很多，除上述兩種方法外，還有更簡便的直接水煮法（Slebos,et al,1990；Smit, et al, 1988 ）、 蛋白酶消化法（Impraimet al.1987；Brice,et al.1989）。
這些方法不經過酚－氯仿－異戊醇抽提、DNA純化等步驟，直接將組織放在去離子水中煮沸10min 或在蛋白酶Ｋ緩沖液中消化４h，DNA即可釋放出來。此提取物可直接用作模板，進行PCR擴增， 但是，我們發現直接水煮法和蛋白酶消化法提取的DNA，擴增率較低，且征對性不好。這可能是由于DNA附著的蛋白質去除不凈而影響DNA變性和與引物的結合，亦可能是由于標本中殘留的固定劑等成分對Taq DNA多聚酶的抑制所致。

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