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人IGF-ⅠELISA試劑盒說明書
閱讀:809 發布時間:2011-7-15人IGF-ⅠELISA試劑盒說明書
藥品名稱:
通用名:人IGF-Ⅰ酶聯免疫分析試劑盒
使用目的:
人IGF-ⅠELISA試劑盒用于測定人血清、血漿、組織或其它相關組織液中胰島素樣生長因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)含量。
實驗原理
人IGF-ⅠELISA試劑盒應用夾心法測定標本中胰島素樣生長因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)水平。用純化的人胰島素樣生長因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)受體包被微孔板,往微孔中依次加入胰島素樣生長因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ),再與HRP標記的羊抗人受體結合,形成免疫復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胰島素樣生長因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中胰島素樣生長因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)抗原濃度。
試劑盒組成
1 | 20倍濃縮洗滌液 | 30ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
2 | 酶標試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 標準品(240μg/L) | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 9 | 標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
標本要求
1.標本采集后盡早進行實驗。
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
3.可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
人IGF-ⅠELISA試劑盒操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180μg/L,120μg/L ,60μg/L,30μg/L,15μg/L)。
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
人IGF-ⅠELISA試劑盒注意事項
1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.嚴格按照說明書操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
7.本試劑不同批號組分不得混用。底物請避光保存。
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.如與英文說明書有異,以英文說明書為準
檢測范圍:
10μg/L -200μg/L
規格:
96人份/盒
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月