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復旦大學研究組發現治療慢性乙型肝炎的新策略
閱讀：881 發布時間：2016-6-22來自復旦大學醫學院醫學分子病毒學重點實驗室的研究人員發現，利用Talen技術剔除被感染細胞中的乙型肝炎病毒（HBV）可以作為一種治療乙型肝炎的新策略。
乙肝病毒(hepatitis B virus)感染會導致人類急、慢性乙型肝炎。據世界性衛生組織報道，約20億人曾感染過乙肝病毒(hepatitis B virus)，其中3.5億人為慢性乙肝病毒(hepatitis B virus)感染者，每年約有100萬人死于乙肝病毒(hepatitis B virus)感染所致的肝衰竭、肝硬化和原發性肝癌（HCC）。目前治療乙肝的藥物主要是干擾素和核酸類似物，用于抑制乙肝病毒(hepatitis B virus)的復制，但是這些藥物不能*清除已經存在于患者細胞核的病毒。
復旦大學醫學院袁正宏教授及其博士研究生陳捷亮利用的的FastTALE Talen技術，設計了靶向不同基因型乙肝病毒(hepatitis B virus)的保守區序列的Talen，導入細胞和模型小鼠后，可以特異結合并切割病毒基因組，導致病毒HBeAg, HBsAg, HBcAg 和pgRNA以及cccDNA的表達與合成減少。同時發現針對乙肝病毒(hepatitis B virus)的Talen和干擾素α聯合使用可以使抑制病毒復制的效果增強。這個研究提示Talen和干擾素α的聯合用藥可能為治療慢性乙肝提供更優化的治療方案。同時，也為其他病毒性疾病的研究和治療提出了新的思路。
該研究成果發表在近日的《Molecular Therapy》雜志上。參與本項研究的單位還有復旦大學公共衛生應用中心及復旦大學醫學微生物學和生物醫學科學研究所
背景介紹：
TALEN 技術（Transcription activator–like effector Nuclease）是一種新的定點基因修飾技術，是基于植物病原體黃單胞菌( Xanthomonas)分泌的一種轉錄激活子樣效應因子( transcription activator–like effector，TALE) 可以識別DNA序列的原理而設計和構建靶向特異基因的TALE蛋白的技術。TALE蛋白的DNA結合域是由可以識別單個核苷酸堿基的氨基酸序列模塊串聯而成的，氨基酸序列與其靶位點的核酸序列有恒定的對應關系。
TALEN 技術是將TALE 蛋白中的DNA結合域與FokI 核酸內切酶的切割域融合，設計和構建能在特定基因位點產生雙鏈斷裂的的技術。雙鏈斷裂可以極大的提高斷裂位點周圍的基因修復活性，利用易錯修復(非同源末端聯結)或者同源重組修復的方式實現特異位點DNA的改造，例如定點基因敲除 (Knock-out) 、基因敲入 (Knock-in) 或點突變修飾等等。該技術成功解決了RNAi技術中knockdown效率低下的問題，同時也克服了鋅指核酸酶（ZFN）技術篩選復雜、成本過高的缺點，也可以避免Crispr/CAS9造成的嚴重脫靶，使定點基因修飾（Knock out、Knock in等）工作變得更為和便捷。TALEN技術現已成功應用于動物（人類、鼠、、魚、家蠶等）、植物（煙草、水稻(Rice)、擬南芥(Arabidopsis thaliana)等）、微生物（酵母、病毒等），無基因序列、細胞類型和物種的限制利用。過去，將高度重復的Tale氨基酸模塊連接在一起相當困難，FastTALE技術的出現解決了這個問題，可以很容易地在1天內完成TALEN的構建。