人β淀粉樣蛋白40（Aβ40）ELISA試劑盒僅供科研使用，定量檢測血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等相關(guān)樣本中人β淀粉樣蛋白42（Aβ42）的濃度。

人β淀粉樣蛋白40（Aβ40）ELISA試劑盒說明書（定量）

使用前請仔細(xì)閱讀說明書。如果有任何問題，請聯(lián)系我們,我們會給你提供專業(yè)的技術(shù)服務(wù)。

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)檢測試劑盒（ELISA）

英文名稱：Human（Aβ42）ELISA KIT

 

【包裝規(guī)格】

96人份/盒

 

【預(yù)期用途】

僅供科研使用，定量檢測血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等相關(guān)樣本中人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)的濃度。

 

【檢測原理】

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)水平。用純化的人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)，再與HRP標(biāo)記的人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)濃度。

 

【試劑盒組成】

1	30倍濃縮洗滌液	20ml×1瓶	7	終止液	6ml×1瓶
2	酶標(biāo)試劑	6ml×1瓶	8	標(biāo)準(zhǔn)品（320μg/L）	0.5ml×1瓶
3	酶標(biāo)包被板	12孔×8條	9	標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液	1.5ml×1瓶
4	樣品稀釋液	6ml×1瓶	10	說明書	1份
5	顯色劑A液	6ml×1瓶	11	封板膜	2張
6	顯色劑B液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1個

注意：使用前請檢查試劑盒中試劑的標(biāo)簽和數(shù)量與表格是否一致

需要但未提供的材料及耗材

  1、酶標(biāo)儀

2、精密移液器及一次性吸頭

3、蒸餾水

4、洗瓶或者自動洗板機(jī)

5、37℃水浴鍋或恒溫箱

6、500ml量筒

7、無粉一次性乳膠手套

 

【儲存條件及有效期】

  1、2-8℃保存，切勿冷凍，有效期6個月。

  2、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回2-8℃冰箱。

 

【適用儀器】

  半自動的酶標(biāo)儀，如Thermo MK3，或者國產(chǎn)酶標(biāo)儀。

 

【樣本要求】

1.樣本類型和采集

血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
    血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注意：檢測前，樣本中可見的沉淀必須去除。不要使用嚴(yán)重溶血或高血脂的樣本。 樣本應(yīng)分裝并貯存于-20℃，以避免人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)活性的丟失。如果在 24 小時內(nèi)檢測，樣本可以 存放在 2 - 8℃。 避免樣本的反復(fù)凍融。在檢測前，冷凍樣本應(yīng)該緩慢地恢復(fù)至室溫，輕柔地混勻。

2.樣本保存和穩(wěn)定性

樣本在2-8℃條件下，可以儲存72h，或者在- 20℃儲存6個月。樣本收集后，不是一次檢測完，請按一次用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融，使用時在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍。

 

【人β淀粉樣蛋白40（Aβ40）ELISA試劑盒操作步驟】

• 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

160μg/L	5號標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
80μg/L	4號標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
40μg/L	3號標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
20μg/L	2號標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10μg/L	1號標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

• 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)孔準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
• 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
• 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
• 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
• 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
• 溫育：操作同3。
• 洗滌：操作同5。
• 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
• 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
• 測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

 

 

【操作程序總結(jié)】

 

【結(jié)果計算】

  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

 

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

1、物理性能

試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝，無破損漏氣。

2、劑量反應(yīng)曲線線性

標(biāo)準(zhǔn)品劑量反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù)r值，大于等于0.9900。

3、精密度

批內(nèi)精密度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行二十次在同一個板塊內(nèi)精度評估。批內(nèi)變異系數(shù)CV%小于10%。

批間精密度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行二十次在不同板塊內(nèi)精度評估。批間變異系數(shù)CV%小于15%。

4、檢測范圍

6μg/L -160μg/L 。

5、靈敏度

低檢出劑量小于1.5μg/L。

6、回收率

三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行五次回收率評估，回收率在85%-115%之間。

7、特異性

本試劑盒識別天然和重組人β淀粉樣蛋白42(Aβ42)，與結(jié)構(gòu)類似物無交叉。

8、穩(wěn)定性

2℃-8℃保存，有效期6個月。

 

【注意事項】

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間Best控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

• 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，Best做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔First孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
• 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

 

 

【常見問題及解決方法】

若實驗效果不好，請及時對顯色結(jié)果拍照，保存實驗數(shù)據(jù)，保留所用板條及未使用試劑，然后 聯(lián)系我公司技術(shù)支持為您解決問題。同時您也可以參考以下資料：

常見問題	可能原因	解決方法
標(biāo)準(zhǔn)曲線梯度差	吸液或加液不準(zhǔn)	檢查移液器及吸頭
	標(biāo)準(zhǔn)品稀釋不正確	稀釋標(biāo)準(zhǔn)品時稍微旋轉(zhuǎn)瓶身
	洗滌不*	保證洗滌時間和洗滌次數(shù)及每孔的加液量
顯色很弱或無色	孵育時間太短	保證充足的孵育時間
	實驗溫度不正確	使用推薦的實驗溫度
	試劑體積不夠或漏加	檢查吸液及加液過程，保證所有試劑按順序足量添加
	稀釋不正確
	酶標(biāo)記物失活或底物失效	混合酶結(jié)合物和底物，通過迅速顯色來檢查判斷
讀數(shù)數(shù)值低	酶標(biāo)儀設(shè)置不正確	在酶標(biāo)儀上檢查波長及濾光片設(shè)置
		提前打開酶標(biāo)儀預(yù)熱
變異系數(shù)大	加液不正確	檢查加液情況
背景值高	酶標(biāo)板洗滌不*	保證每步清洗*；如果用自動洗板機(jī)，請檢查所有的出口是否有堵塞；是否使用試劑盒配備的洗滌液
	洗液有污染	配制新鮮的洗液
靈敏度低	試劑盒保存不當(dāng)	按說明書要求保存相關(guān)試劑
	讀數(shù)前未終止OD	讀數(shù)前應(yīng)在每孔中加入終止液

【生產(chǎn)企業(yè)】

企業(yè)名稱：上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

地    址：上海市閔行區(qū)閔北路88弄1-17號、18-30號第12幢168室