詳細介紹
sTNFαR,人可溶性腫瘤壞死因子α,腫瘤壞死因子
產品名稱:人sTNFαR ELISA試劑盒
產品別名:人可溶性腫瘤壞死因子α受體ELISA試劑盒
英文名稱:Human soluble Tumor Necrosis Factorαreceptor,sTNFαR ELISA KIT
產品規格:96T/48T
ELISA關鍵步驟為以下幾點:
1、盡量用八道或者十二道移液器加樣。對于相同的試劑,經如二抗,酶,顯色液,終止液等。
2、自己的樣品,因為每一孔的樣品不一樣,用排槍加有些麻煩,如果一次的樣品比較少,而自己加樣又比較快,可以一個孔一個孔的加,但如果想一次把96或者48T的做完,可以先擺好一些PCR管或者準備一個96孔細胞培養板。將自己的樣品先加到PCR管或者培養板中(此板間距與酶板板相同)。記得加一定的余量,如一次加樣是50ul,可以先加70ul。加完后再用排槍加樣,這樣可以縮短加樣時間,減小每個孔間的時間誤差。
3、如果有多余的孔,標準品孔可以做復孔,在自己的樣品前加一次標準品,加完樣品后再加一次標準品。如果孔不夠,那么可以將標準品放在樣品中間加。
操作步驟:
1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。
3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
4. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
8. 取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。
sTNFαR,人可溶性腫瘤壞死因子α,腫瘤壞死因子