詳細介紹
人APF ELISA試劑盒
產品別名:人抗核周因子抗體ELISA試劑盒
英文名稱:Human anti-perinuclear factor,APF ELISA KIT
產品規格:96T/48T
操作步驟:
1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。
4. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
5. 每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育5分鐘。避免光照。
8. 取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。
試劑的準備:
1. 標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:
500 ng/ml | (6號標準品) | 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul |
250 ng/ml | (5號標準品) | 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
125 ng/ml | (4號標準品) | 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
62.5 ng/ml | (3號標準品) | 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
31.2 ng/ml | (2號標準品) | 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
15.6 ng/ml | (1號標準品) | 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
0 ng/ml | (空白對照) | 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul |
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