徠卡共聚焦顯微鏡的故障排除

在某些實驗過程可能不明原因的無法得出滿意結(jié)果，此時，一個很好的試驗方法是用徠卡熒光顯微鏡檢查標(biāo)本，如果在徠卡熒光顯微鏡下肉眼可看到熒光，則在徠卡共聚焦系統(tǒng)，其熒光信號應(yīng)很亮。如果在徠卡共聚焦系統(tǒng)看不到圖像，一方面要檢查使用的熒光控針與儀器的激發(fā)波長是否匹配，另一方面應(yīng)使用己知的測試樣本全部檢查共聚焦系統(tǒng)各部分。圖像的數(shù)字文件應(yīng)適當(dāng)編號，并為具體的實驗者所。尤其是在進(jìn)行圖像命名時盡量少用姓氏作為文件名，這樣很容易混亂和重復(fù)。而且每幅圖像應(yīng)詳細(xì)記錄各種采集參數(shù)，包括激光功率、增益、背底水平、針孔直徑、zoom值和使用的物鏡。

在使用徠卡共聚焦顯微鏡實驗本身的問題常常是由試劑的降解引起的，應(yīng)進(jìn)行一系列的診斷測試。實驗使用的試劑自己親自新鮮配制。抗體應(yīng)等分為小份后分別儲存。許多試劑可以重復(fù)使用，而且并不影響實驗結(jié)果，尤其對于昂貴的試劑和稀有的試劑更應(yīng)注意節(jié)約和盡量重復(fù)使用。

有時實驗失敗可能是由于抗體降解引起的。陳舊的標(biāo)本可造成背底熒光的增加，從標(biāo)記的第二抗體分離出來的熒光色素和彌散到組織中的熒光色素，可以引起熒光滲透。在盡可能的情況下，應(yīng)使用新鮮制備的標(biāo)本觀察。有時改變熒光控針的濃度和分布也對獲得理想的實驗結(jié)果大有幫助。如熒光黃滲透到羅丹明通道，可將熒光團(tuán)調(diào)使羅丹明位于較強(qiáng)的通道，因為熒光黃的激發(fā)光譜有一個尾部位于羅丹明的激發(fā)波長內(nèi)。

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